由血液来源的多能干细胞生成神经元细胞

0 次观看 • 2:18 分钟 • July 8th, 2025

取一块微孔板,其孔底部放置有玻璃盖玻片。

加入带正电荷的聚合物以包被盖玻片,并进行洗涤以去除未结合的聚合物。随后用细胞外基质蛋白处理盖玻片,包被后吸除未结合的蛋白。

该涂层作为培养基质,可促进细胞黏附。

向孔中加入诱导培养基,并接种血液来源的多能干细胞(BD-PSCs)悬液。这些细胞具有分化为多种细胞类型的潜能,由血液来源制备而成 通过 重编程血液前体细胞

孵育使细胞贴附于基质。诱导培养基中的生长因子和营养物质将BD-PSCs转化为神经前体细胞。

加入含有神经生长因子的分化培养基并进行孵育,诱导神经前体细胞分化为神经元表型,表现出延伸的细胞突起和细胞间连接。

将玻璃盖玻片放入4孔板中,并用双蒸水按1:5比例稀释的多聚-L-鸟氨酸溶液包被。将盖玻片在37摄氏度孵育1小时后,用双蒸水洗涤。

缓慢融化每毫升含 0.5 至 2 毫克的层粘连蛋白,并将其加入到盖玻片的上表面。在 37°C 下孵育 2 小时,然后用移液器吸去多余的层粘连蛋白,再向培养皿中加入神经元培养基 N2。

将BD来源的CD45阴性细胞接种于涂有层粘连蛋白-鸟氨酸的玻璃盖玻片上,在含5%二氧化碳、37摄氏度的培养箱中,使用N2培养基培养两天,以启动新生成BD细胞的神经元分化。随后,将细胞转入神经元分化培养基中,在37摄氏度、5%二氧化碳的培养箱中继续培养16天。

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