将人类胚胎干细胞分化为神经前体细胞

从一个包被有基底膜基质的多孔板开始，该基质包含细胞外多聚物和黏附蛋白。

在含有Rho激酶抑制剂的生长培养基中，将人胚胎干细胞的单细胞悬液接种至孔板中。

孵育以使干细胞附着于基质。

细胞吸收抑制剂后，该抑制剂可阻断Rho-激酶酶活性，从而防止细胞凋亡性死亡。

这有助于促进细胞的存活并维持其未分化状态。

用富含生长因子并含有靶向特定 ALK 受体抑制剂的神经诱导培养基替换生长培养基。

这些抑制剂与受体结合，阻断 BMP 和 TGF-β 信号通路，从而抑制细胞向内胚层或中胚层前体细胞分化。

这会导致干细胞选择性分化为外胚层前体细胞。

这些外胚层前体细胞利用培养基中的营养物质和生长因子进行增殖，并进一步分化为神经前体细胞。

将细胞以每孔 2 x 10⁵ 个细胞的密度接种于基底膜基质包被的 6 孔板中，每孔加入 2 毫升 mTeSR1 培养基，并添加 10 微摩尔 ROCK 抑制剂。24 小时后，更换为神经诱导培养基，其中添加 1 微摩尔背维甲酸（dorsomorphin）和 5 微摩尔 SB431542。在神经诱导的前四天内，每隔一天更换一次培养基，之后改为每天更换，直至第七天达到汇合状态。