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神经科学
0 次观看 • 3:50 分钟 • July 8th, 2025
取浸没在切片溶液中的人脑组织。该溶液的生物学 pH 值和营养成分有助于维持组织的功能活性。
去除最外层的脑膜，并修剪组织以形成一个平坦的表面。
吸去组织上多余的溶液。将修剪好的组织用琼脂糖块固定在样品盘上，使组织与琼脂糖块保持接触，以便于切片。
将组织置于振动切片机缓冲槽中，并用冰冷的切片液覆盖组织。
使用振动切片机生成均匀的切片，以保持组织结构的完整性。
修剪掉多余的组织，确保灰质和白质的比例一致。
将切片放入含有培养基的多孔板中，并进行孵育。
切片悬浮在培养基中以确保营养物质的均匀获取，这种技术被称为游离式切片培养。
定期补充添加神经生长因子的培养基，以维持组织活性。
将样本转移至含有切片液的培养皿中。使用精细的外科工具，小心地尽可能去除残留的脑膜。根据实验设计所需的特定特性，选择最佳的样本方位，并使用24号手术刀片修整出一个平坦的表面，作为将被粘附到样本盘上的基底。
使用一次性塑料勺和精细的画笔从培养皿中取出组织片段，并用滤纸吸去多余的溶液。接着，使用超级胶水将组织固定在振动切片机的样品皿上，直至组织牢固地粘附在皿上并与琼脂糖块接触。
将振动切片机样本盘放入振动切片机的缓冲槽中。将刀片架固定到位，并确保剃刀刀片牢固安装。加入切片液，确保液体覆盖样本和刀片。随后，开始将样本切成200微米厚的切片。
将切片从缓冲液托盘转移至含有切片溶液的培养皿中，修剪松散的边缘和多余的白质，使皮层与白质的比例约为70%皮层和30%白质。在超净工作台中，向24孔板的每个孔中加入600 µL培养基，并在接种切片前于36 °C、5% CO₂条件下孵育至少20分钟。此后，使用毛笔将每片切片接种至各孔中。
如果板中有任何未使用的孔，请向其中加入400微升无菌水。在36摄氏度、5%二氧化碳条件下孵育。向10毫升先前准备好的培养基中添加脑源性神经营养因子，使其终浓度为50纳克/毫升。
培养8至16小时后，从每个孔中移除333微升条件培养基，并加入133微升新鲜的BDNF补充培养基。此后每24小时，用新鲜的BDNF补充培养基更换三分之一的条件培养基。