建立中间神经元与室管膜周围内皮细胞的共培养体系

取一个涂有细胞培养基质的培养皿，以促进细胞黏附。

培养皿中含有一个中心未连接底部的单孔培养插件，形成一个明确的区域。该区域的轮廓已在培养皿上标出，用于观察细胞迁移。

将细胞悬液引入含有脑室周围血管内皮细胞（PVECs）的区域，PVECs 是大脑血管壁的内皮细胞，以及在大脑发育过程中沿 PVECs 迁移的中间神经元。

加入共培养培养基以保持培养皿湿润，并进行孵育，促进细胞贴附于基质。

移除插入物以消除物理屏障；更换培养基，再次孵育。

PVECs 增殖，使内皮细胞网络扩展到插入物边界之外。

PVECs 分泌一些因子作为导向信号，引导中间神经元沿着 PVEC 网络迁移。

用于分析的中间神经元迁移共培养体系已准备就绪。

进行共培养实验时，将30,000个GABA能中间神经元和30,000个人脑室周围内皮细胞悬浮于70 µL共培养基中。随后，将该细胞悬液接种至一个插件培养室的孔内。48小时后，移除插件。将共培养体系在37 °C、5% CO₂条件下孵育5天。