在器官型脑片共培养模型中建立脑肿瘤

从琼脂糖包埋的小鼠脑切片开始。

将脑切片放置在含有培养基的膜插件上。

将切片浸入以确保其均匀接触营养物质。

从插入物中收集少量培养基，并将其转移至孔的底部。

从插入物中移除多余的培养基。

将插入片段转移至含有培养基的培养皿中。

小心移除切片上的琼脂糖边缘，以便后续操作能够顺利进行。

将插入物置于含有培养基的新孔中，并进行孵育以促进组织切片恢复。

将人脑肿瘤细胞加入脑片并孵育。

肿瘤细胞与脑细胞及切片内的微环境相互作用，启动增殖并建立三维共培养模型。

使用带槽的勺子将脑片放入插入物的培养基中，并轻轻按压脑片使其完全浸没。对所有脑片重复此操作。接着，从插入物顶部吸取一毫升切片培养基，加入到孔的底部。

移除并弃去多余的培养基，直至脑切片周围琼脂糖的边缘可见为止，并对剩余的切片进行相同操作。然后用镊子夹住插入件的边缘，倾斜以去除多余的培养基。

迅速将插入物转移到含有1毫升切片培养基的35毫米培养皿中。去除组织周围的琼脂糖，注意不要拉伸或损伤切片，也不要刺破膜。随后，将插入物移回六孔板中，并对剩余切片重复上述操作。

在关闭吹风机的组织培养罩内，从每张膜上移除琼脂糖碎片。随后，将脑片转移至先前准备好的六孔板中，在37摄氏度下保存24至48小时。在此步骤中，于关闭吹风机的组织培养罩内，将插入物转移至含有新鲜脑片培养基的新六孔板中。然后，将肿瘤细胞以65 µL培养基滴加至脑片中央。将脑片在37摄氏度下培养一周，并每天更换培养基。