非转基因与转基因人类多能干细胞向神经前体细胞的分化

取一个包被有细胞外基质（ECM）的多孔板。

在不同的孔中，分别加入非转基因和转基因的人多能干细胞，或称 hPSCs，置于培养基中。

转基因 hPSCs 携带一个位于抗生素诱导型启动子下游的转基因。该转基因编码一种可诱导神经分化的转录因子。

孵育以促进细胞与细胞外基质（ECM）的黏附。培养基中的小分子可抑制细胞凋亡，促进细胞增殖。

加入解离溶液以解离细胞；加入培养基终止解离，然后将细胞转移至另一经细胞外基质（ECM）包被的微孔板中，以促进细胞增殖。

将含有小分子的神经分化培养基加入非转基因细胞，同时将诱导型抗生素加入转基因细胞。

小分子诱导非转基因细胞分化为神经前体细胞或NPC。在转基因细胞中，抗生素诱导的转录因子表达会激活分化为NPC所需的基因。

将神经前体细胞维持在培养中以用于后续应用。

为了生成非转基因的神经前体细胞和神经元，或称为hNeurons，请将第14天的人多能干细胞（hPSC）来源的神经前体细胞以每孔2毫升神经培养基和Y27632接种至细胞外基质（ECM）包被的六孔板中。

若使用多西环素诱导型iNeurons，当细胞融合度约为35%时，加入含多西环素的神经培养基以诱导分化并激活基因表达。两天后，每天为转基因和非转基因细胞系每孔加入2毫升神经培养基。持续培养至细胞融合度达到70%，准备进行传代。