生成星形胶质细胞与神经元的三维共培养球体以诱导突触形成

取一个涂有表面活性剂的多孔板，以降低孔内的表面张力。

在合适的培养基中加入所需比例的星形胶质细胞和神经元。

离心以沉淀细胞，然后孵育。

低表面张力阻止细胞黏附于孔板表面，导致细胞聚集。

细胞通过多种膜相互作用（包括黏附分子）相互黏附，形成三维共培养球体。

收集球体并转移至离心管中。

让球体沉降。移除上清液，并加入新鲜培养基。

将球体转移至含有适当生长培养基的旋转烧瓶中，并在持续旋转条件下孵育。

在球状结构中，神经元相互延伸出突起，形成称为突触的连接，而星形胶质细胞则向突触方向延伸，与神经元建立紧密的关联。

将解离后的hAstros与hNeurons或iNeurons按所需比例混合，总体积为2毫升，加入微孔板的每个孔中。以100 × g离心微孔板 g 三分钟，然后放回培养箱中孵育两天。

一天后，培养板中应已形成致密堆积的微球。使用1,000微升移液器轻轻将球体从微孔中移出。用培养基轻轻施加压力于微孔底部，以去除任何额外粘附的球体。

将所有类球体收集至15毫升锥形管后，静置使其沉降。然后通过先吸除旧培养基，再加入至少2毫升新鲜培养基的方式洗涤类球体。将类球体加入含有50至60毫升培养基的旋转培养瓶中。将培养瓶置于培养箱内的磁力搅拌器上，转速设为60 RPM。类球体培养至少需要三周时间以形成突触。