0 次观看 • 3:58 分钟 • July 8th, 2025
从贴壁培养的骨髓基质细胞开始。
将细胞置于低氧环境（即氧气水平降低的条件）下处理所需的时间。
分离经低氧预处理的细胞，离心后弃去上清液。将细胞重悬于含有神经生长因子的神经前体细胞培养基中。
将细胞转移至低吸附培养板中并进行孵育。
缺氧预处理和神经元生长因子可诱导基质细胞分化为神经祖细胞。
低吸附培养板表面使前体细胞保持悬浮状态，促进其增殖并聚集成三维神经球。
收集神经球，离心并去除上清液。将细胞重悬于含有胶质细胞特异性生长因子的胶质诱导培养基中。
将神经球转移至包被有层粘连蛋白（一种细胞外基质成分）和多聚-D-赖氨酸（一种带正电荷的合成聚合物）的培养板中。
包被的表面促进细胞黏附，有助于神经球的附着。
胶质细胞特异性生长因子可促进神经前体细胞分化为类似施万细胞的细胞，这些细胞表现出施万细胞特有的锥形形态。
进行缺氧预处理时，首先松开环形夹，并用70%乙醇清洁暴露的部分。然后，将缺氧室拆解为各个组件，放入超净工作台中，在紫外灯下灭菌15分钟。
接下来，用 10 毫升 PBS 洗涤一个 80% 至 90% 汇合度的 MSC 培养物（方法如前所述），并用添加了 25 毫摩尔 HEPES 的新鲜 MSC 生长培养基处理培养物。将处理后的培养物放入重新组装的低氧培养室中，并拧紧环形夹。密封培养室的连接端口以确保无气体泄漏，并以每分钟 10 升的流速向室内通入由 99% 氮气和 1% 氧气组成的混合气体。
5分钟后，将培养皿放入细胞培养箱中孵育16小时。次日早晨，按前述方法消化细胞，并通过离心收集细胞。用神经前体细胞培养基重悬细胞沉淀，以每平方厘米6 × 103个细胞的密度接种于低吸附六孔板中，在37°C、5% CO2条件下培养12天。
在第6至7天应观察到大量非贴壁的细胞球，而在第10至12天时，低氧条件培养的细胞中出现的神经球数量明显多于常氧条件培养的细胞。在第12天，使用10毫升移液管将神经球转移至15毫升锥形管中，并通过离心收集神经球。
将球体悬浮于DMEM/F12培养基中，每平方厘米接种5至10个神经球，置于经多聚-D-赖氨酸和层粘连蛋白包被的六孔板中，每孔加入1.5毫升胶质诱导培养基。球体细胞培养至少维持七天，每三天更换一次培养基。