一种在水凝胶微柱内体外生成星形胶质细胞支架的方法

取一个培养皿，其中包含由已知直径的空心管组成的微柱阵列载具。

由水凝胶制成的微柱充满缓冲液，以防止干燥。

在体视显微镜下，移除缓冲液，并加入冰冷的胶原蛋白溶液，即细胞外基质的一种组分。

沿培养皿内边缘引入培养基，以维持微柱的水合状态。在生理条件下孵育，使胶原蛋白聚合，在微柱内部形成涂层。

将星形胶质细胞加入微柱内，并孵育以促进星形胶质细胞与胶原的黏附。

接下来，用培养基填充培养皿，并在生理条件下维持培养。

由于微柱的直径较窄，星形胶质细胞呈现出 bipolar 形态，其突起沿微柱长度方向延伸。

随着时间的推移，星形胶质细胞会自我组装，形成包含致密星形胶质细胞突起束的三维支架。

包埋在水凝胶中的星形胶质细胞支架已准备好用于后续实验分析。

在生物安全柜内，用共培养基配制浓度为1毫克/毫升的大鼠尾部I型胶原溶液，然后置于冰上。根据需要使用酸或碱调节细胞外基质（ECM）溶液的pH值，直至pH稳定在7.2至7.4范围内。用镊子将微柱载具转移至35或60毫升的培养皿中。在体视显微镜引导下，将微量移液器的10微升吸头置于每根微柱的一端，吸出腔内的DPBS溶液和气泡。

用胶原蛋白溶液润洗P10移液枪。将10微升吸头紧贴每个微柱的一端，加入足够溶液以充满管腔，然后在微柱两端分别点加细胞外基质（ECM）储液。待所有微柱填充完毕后，在培养皿周围环形加入共培养基，以防止微柱干燥。

将含有微柱的培养皿在37摄氏度和5%二氧化碳条件下孵育至少一小时，以促进胶原蛋白聚合，然后再加入细胞。随后，将P10微量移液器的吸头置于微柱的一端，转移约5微升细胞悬液进入管腔以充满微柱。在所有微柱接种完成后，将培养装置于37摄氏度和5%二氧化碳条件下孵育一小时，以促进星形胶质细胞与细胞外基质（ECM）的黏附。

孵育结束后，小心地向含有已接种微柱的培养皿中加入共培养基，35 毫米和 60 毫米的培养皿分别加入 3 或 6 毫升。将接种后的微柱在 37°C 和 5% 二氧化碳的培养环境中继续培养，以促进星形胶质细胞束的自组装，通常在 6 至 10 小时后形成束状电缆样结构。