通过悬滴法从小鼠胚胎干细胞生成神经前体细胞

0 次观看3:09 分钟 • July 8th, 2025

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取小鼠胚胎干细胞悬液。

离心,弃去上清液,并将细胞重悬于神经分化培养基中。

将悬液滴加到培养皿盖内侧。

在底部培养板中加入缓冲液,以防止液滴干燥。将盖板盖在底部培养板上,形成悬滴培养体系,并进行培养。

由于重力作用,细胞聚集并形成称为拟胚体(embryoid bodies 或 EBs)的三维聚集体。

将液滴放入含有分化培养基的培养板中,在振荡条件下孵育以促进拟胚体的形成。

离心并去除培养基;用添加了视黄酸的分化培养基重悬EBs,转移至培养板中,并进行培养。

视黄酸进入细胞后,触发转录复合物的形成。该复合物诱导基因表达,进而启动向神经前体细胞的分化。

分化后的EBs已准备好用于后续应用。

首先建立悬滴细胞培养。对于10厘米的细胞培养皿,将细胞浓度调整为每20微升分化培养基中含有500个细胞。准备足够量的细胞悬液,以制备50个20微升的液滴。使用微量移液器或重复移液器将20微升的细胞悬液滴加到组织培养皿盖内表面,确保各液滴之间保持适当距离,以防止其相互融合。

向培养板中加入 5 至 10 毫升 PBS,小心地将盖子重新盖好。将培养物置于 37 摄氏度的培养箱中孵育。两天后,收集盖子上的液滴,并将其转移至含有 10 毫升分化培养基的 10 厘米细胞悬浮培养板中。然后,将培养板置于培养箱内的摇床上,以低速振荡。再经过两天后,以 200 × g 离心 3 分钟,弃去上清液。

为了诱导类胚体分化为神经前体细胞,将细胞重悬于含有5 µM视黄酸的分化培养基中。将培养板孵育两天。随后,通过倾斜培养板并用移液器吸出,更换至少一半的培养基为新鲜培养基。

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最后更新:15 八月 2026