0 次观看 • 3:05 分钟 • July 8th, 2025
从基因改造的造血祖细胞悬液开始。
这些细胞表达将其重编程为神经干细胞所必需的转录因子。该过程称为直接重编程。
将细胞转移至包被有细胞外基质的多孔板中，加入神经前体细胞培养基，孵育。
细胞外基质为细胞附着和生长提供了三维支架。
在孵育过程中，造血祖细胞表达的转录因子启动一系列分子事件，使其转化为神经干细胞。
神经前体细胞培养基含有有利于诱导性神经干细胞存活的因子。
孵育后，将该培养基更换为新鲜的神经前体细胞培养基，以促进细胞增殖。
使用细胞刮刀分离细胞。
收集此悬浮液，并将细胞转移至含有神经干细胞培养基的孔中。
孵育以维持诱导的神经干细胞。
当细胞融合度达到30%至50%时，吸除上清液并保留，然后向每孔加入1毫升神经前体细胞培养基。若需利用上清液中的细胞球制备备份培养板，可将保留的上清液在170 × g 条件下离心10分钟。
然后，吸去上清液，并将沉淀重悬于神经前体细胞培养基中。接种至经Matrigel包被的24孔板中；每隔一天更换各孔细胞的培养基，直至细胞汇合度达到60%至80%，通常约需一周时间。
当细胞达到所需汇合度时，吸除上清液，每孔加入1毫升神经干细胞培养基。随后使用细胞刮刀刮下细胞，并用移液器轻轻吹打使其解离。
接下来，将24孔板中一个孔的细胞转移至6孔板的一个孔中。向孔中再加入1毫升培养基，待所有孔均重复此操作后，将6孔板放入37摄氏度、5%二氧化碳的培养箱中。
每隔一天更换一次培养基全量，直至细胞达到60%融合度。每次传代后，按1:3比例将细胞解离并重新接种，方法如前所述。