一种从小鼠胚胎干细胞生成神经前体细胞的技术

取悬浮于分化培养基中的小鼠胚胎干细胞（mESCs），进行孵育。

在悬浮培养中，小鼠胚胎干细胞（mESCs）会聚集形成一种称为类胚体（embryoid bodies，EBs）的结构。

EBs 是三维细胞聚集体，可模拟胚胎发育过程，并能分化为神经细胞。

将EBs转移至离心管中，静置使其自然沉降。

移除营养耗尽的培养基；用新鲜培养基重悬EBs，并将其转移至培养皿中。

孵育悬浮培养物以促进胚状体（EBs）的生长。

将悬浮在培养基中的拟胚体转移至多孔板中。孔板经黏附蛋白包被，可使拟胚体附着。

加入视黄酸，视黄酸进入细胞并触发转录复合物的形成。

该复合物可诱导基因表达，促进细胞分化为神经前体细胞（NPCs），后者表现出延伸的细胞突起。

将150万个鼠胚胎干细胞加入含有10毫升基础分化培养基的非黏附性细菌培养皿中，在37摄氏度和5%二氧化碳条件下孵育，以促进胚状体形成。

两天后，将细胞聚集体转移至15毫升离心管中，静置使其自然沉降。吸除上清液，加入10毫升新鲜的基础分化培养基以重悬胚状体。随后，将其重新接种至新的非黏附培养皿中，继续培养两天。

收集约50个拟胚体，并将其接种至每孔2毫升基础分化培养基中，置于明胶包被的六孔板中。如需进行视黄酸诱导，向每孔加入2微升RHA储备液，使其终浓度为1微摩尔。将培养板放回培养箱，继续分化细胞4天。