神经前体细胞向神经元的分化

从含有小鼠胚胎干细胞来源的神经前体细胞的明胶包被多孔板开始，细胞培养于富含营养的基礎分化培养基中。

前体细胞利用培养基中的这些营养物质来维持其活性。

孵育以使细胞贴附于明胶包被的表面，然后洗涤以去除未贴附的细胞和碎片。

加入含有稳定剂、额外营养成分以及对细胞分化至关重要的神经生长因子的基础分化培养基，然后进行孵育。

前体细胞消耗营养物质和生长因子，启动其向神经元的分化，并开始延伸细胞突起。

同时，稳定剂与有毒代谢物相互作用，保护发育中的神经元免受氧化损伤，维持其活性。

定期更换培养基以维持营养水平。

随着时间推移，神经元逐渐成熟，发育出轴突——即较长的细胞突起。

此外，它们还长出较短的细胞突起——树突，证实了干细胞向神经元的分化。

将约 500,000 个鼠胚胎干细胞衍生物以每孔 2 毫升基础分化培养基接种至 0.1% 明胶包被的培养板中。将衍生物随机分为三组，用于测试三种第二阶段分化方案。将培养板孵育 6 小时后，用 2 毫升 PBS 洗涤细胞两次，并根据实验方案向每孔分别加入 2 毫升基础分化培养基、N2 B27 培养基 1 或 N2 B27 培养基 2。将培养板放入培养箱中，继续培养 10 天以诱导细胞分化，每两天更换一次相应的培养基。