从感觉神经节中分离细胞

取预先洗涤的感觉神经节放入离心管中。

加入含有消化酶混合物的解离溶液并进行孵育。

这些酶可降解细胞外基质，释放出单个细胞。

孵育后，移除解离溶液。

用磷酸盐缓冲液清洗神经节，并加入新鲜的解离液。

用移液器上下吹打神经节以分离细胞。

将悬液通过细胞滤筛，以去除任何团块。

收集滤网底部残留的所有细胞，并将其放入试管中。

将细胞悬液铺在密度梯度管上，然后离心。

根据形状和质量的差异，细胞迁移至下层，而细胞碎片则保留在上层。

弃去上层液体。

向剩余的细胞悬液中加入新鲜培养基，然后离心。

弃去上清液，并将感觉神经节细胞保存以供后续使用。

收获感觉神经节后，从每支试管中吸出500微升神经节分离液，注意不要扰动神经节。接着，向每个样本中加入1毫升磷酸盐缓冲液（PBS），静置，待神经节沉降至试管底部。

随后，移除 PBS，并向神经元中加入 1 毫升含有消化酶的神经节解离液。根据消化酶的使用期限，在 37 摄氏度下孵育适当时间，每 15 分钟轻轻振荡并轻弹试管数秒，以确保神经节完全浸没于消化液中。

在消化神经细胞的同时，缓慢而小心地将400微升新配制的12%密度溶液逐滴加入每份样品的1.5毫升离心管中，覆盖在400微升28%密度溶液之上。应可见两层分明的液体，其中一层比另一层颜色更深。

消化结束后，弃去消化酶，并用1毫升PBS如上所述清洗神经节两次。第二次清洗后，向每根试管中加入200微升新鲜的神经节分离溶液。

然后，使用200微升移液器并调至100微升体积，将神经节上下吹打数次，以使细胞解离成单细胞悬液，注意避免产生气泡。当肉眼观察不到完整的组织碎片时，用一只手牢牢握住70微米细胞筛，将解离后的细胞溶液吹入筛网中央。随后，用100微升新鲜的神经节解离液冲洗解离管，以收集残留的细胞。

将洗涤液通过过滤器过滤，并使用新的移液枪头吸取过滤器下方残留的含细胞溶液，将其加入细胞悬液中。随后，小心地将全部300微升细胞液叠加到先前制备好的密度梯度液上方，通过离心收集神经节细胞。

离心结束后，小心移除上层700微升溶液，其中含有大部分细胞碎片。然后，将700微升新鲜的神经节解离液与剩余细胞混合。通过离心收集细胞沉淀，并小心弃去上清液。