0 次观看 • 5:23 分钟 • July 8th, 2025
取自啮齿类动物脑组织获得的脑切片。这些切片包含海马体，其中含有海马神经元。
将脑切片转移至含有鸡血浆的盖玻片上。
将血浆与凝血酶混合后加入切片中。凝血酶可诱导血浆凝固，形成一种生物支架，促进切片与盖玻片的黏附。
取带有平面侧壁的滚瓶，其平面侧壁上有一个孔，且在管外侧孔周围附有粘性圆盘。
将盖玻片放置在粘附圆盘上，确保脑切片朝向管内侧。
向试管中加入神经元培养基，并通入二氧化碳与空气的混合气体。
盖上管盖，将管子放入滚轴架中，并以滚动方式孵育。
通过滚动培养提供的通气以及培养基中的营养成分，可支持脑片的长期培养。
首先，准备好滚轴管架，并按照随附的文字实验方案制作一个钻孔辅助夹具。使用该夹具将一个具有平面侧的1厘米塑料培养管固定在适当位置，使平面朝上。然后，在距管底1厘米处、且位于管壁两侧正中间的位置，钻一个直径为6毫米的孔。
使用旋转去毛刺工具将孔的边缘打磨光滑，并在孔的内侧边缘加工出四个凹槽，以便在旋转过程中促进孔内液体的排出。接着，用70%乙醇冲洗管子，然后在生物安全柜中风干。将管子与一些直径12毫米的打孔粘性硅橡胶垫片一起置于紫外灯下照射40分钟，进行灭菌。
20 分钟后，重新调整试管和圆盘的位置，以确保所有暴露的表面均得到消毒。接着，撕下粘性圆盘的白色背衬。对齐孔位，并将硅橡胶固定在试管外侧。
获得脑片后，取2微升鸡血浆置于已制备的盖玻片光刻面中央。轻轻涂抹血浆，使其形成直径为3至4毫米的斑点。然后，使用无菌的细头刮铲挑起已制备的脑片。用闭合的镊子固定脑片，使其附着在刮铲尖端。将刮铲接触盖玻片上的血浆斑点，并用闭合的镊子将脑片推至盖玻片上。
在放置切片前，先在盖玻片上添加一层薄薄的鸡血浆，然后加入极少量经凝血酶处理的血浆以覆盖切片。如果切片上浮，则在去除凝块时无法保持附着状态。
接下来，在另一支离心管中混合 2.5 µL 血浆和 2.5 µL 凝血酶。迅速将 2.5 µL 该混合液滴加至脑片上方及周围，轻轻吹打混匀。移除先前固定在滚轮管上的硅橡胶粘合剂暴露面的透明塑料覆盖层。然后，将带有脑片的盖玻片放置在粘合剂上，使脑片与孔洞位置对齐。
为确保粘附性，在将盖玻片转移至生物安全柜的过程中，用拇指均匀按压盖玻片表面，施加轻柔而均匀的压力，并保持约1分钟。
将盖玻片压紧在管壁上以确保其粘附且不漏液时，压力必须恰到好处，并需维持足够长时间，以消除密封剂中的空气通道。压力过大将导致盖玻片破裂。
在生物安全柜中，向每根试管加入 0.8 毫升完全神经基础培养基 A。然后，通过由夹子牢固固定的、带有无菌棉塞的巴斯德吸管通入 5% 二氧化碳与 95% 空气的混合气体。用此气体混合物冲洗滚管，并在将吸管从管口移出时迅速盖紧管盖。
接下来，用切片编号和架子编号标记离心管。将离心管插入滚轴架中，确保其几何分布平衡。如果离心管数量为奇数，需添加空管以达到平衡。
将架子放入35摄氏度的滚筒培养箱中，滚筒转动以使滚筒架保持旋转，从而使培养基位于试管底部。通过将培养箱前部抬升至一块木板上，使其向后倾斜约5度。