0 次观看 • 4:13 分钟 • July 8th, 2025
取人胶质母细胞瘤组织，这是一种起源于胶质细胞的原发性脑肿瘤。
使用预冷的处理液冲洗组织，以去除残留血液。
将组织切成小块，并放入含有熔融琼脂糖的包埋模具中。
将模具冷藏，使琼脂糖聚合形成稳定的凝胶基质。
将组织块从模具中取出，并固定在振动切片机的样本板上。
加入冰冻的处理液以浸没组织块。通入含氧气体混合物以对液体进行通气，维持组织活性。
将包埋的肿瘤组织切成薄片。
将切片转移至含有冰冻处理液的培养皿中，以保存组织结构。
然后，将组织切片接种于含有切片培养维持培养基的培养板小室中的可渗透膜上。
在生理条件下维持脑片。脑片培养已准备好用于后续实验分析。
首先使用无菌镊子将空的聚四氟乙烯（PTFE）培养插件放入六孔板的每个孔中，每孔含 1 毫升切片培养维持培养基。待所有插件均加入后，将六孔板置于 37 摄氏度、5% CO2 的加湿水套式组织培养箱中。
接下来，将肿瘤组织块放入含有冰冻处理液的培养皿中，用移液器吸取新鲜培养基轻柔冲洗组织三次，以去除任何黏附的红细胞。第三次洗涤后，使用手术刀将肿瘤组织切成约3×3×10毫米的条状，仔细去除附着的血管，并避免使用坏死或经电灼处理的组织。
当所有组织修整完毕后，将 5 至 7 毫升 37 摄氏度的液态琼脂糖加入一个 2 立方厘米的塑料包埋模具中，并将琼脂游戏副本放在冰床上冷却 1 分钟。将 2 至 4 条组织条放入琼脂糖中，使其长轴垂直定向，在放置组织后继续将模具置于冰上 2 至 5 分钟。
当琼脂糖凝固后，用解剖刀切割模具边缘，轻轻将琼脂糖块从模具中取出，并使用足量的一滴氰基丙烯酸酯胶将琼脂糖块固定在振动切片机的样品板上。
胶水凝固后，将琼脂糖块浸入冰冷的孵育液中，并使用剪裁过的无菌塑料移液管向振荡切片机储液槽内的孵育液中通入5% CO2 和95% O2 的混合气体。将振荡切片机的切片厚度设置为300至350微米，并根据组织硬度及振荡切片机的技术参数调整刀片前进速度和振幅。
根据计划的实验分析获取相应数量的切片。使用不锈钢微型刮铲在获取切片的同时将其转移至含有冰冻处理液的培养皿中。当所有切片均获取完毕后，使用微型刮铲将每一片切片转移至一个单独的聚四氟乙烯（PTFE）插件上。
孵育12至24小时后，将含新鲜脑片培养维持培养基的新六孔板置于细胞培养孵箱中平衡15分钟。然后用无菌镊子夹住每个插入物的边缘，将插入物转移至新六孔板的各个孔中。