0 次观看 • 3:35 分钟 • July 8th, 2025
从包含神经元和多种非神经元细胞的海马组织样本开始。
加入蛋白酶溶液。该酶可降解组织的细胞外基质，启动细胞解离过程。
用铺板培养基洗涤，以去除残留的酶。
反复吹打消化后的组织，以机械方式将细胞从组织中解离，形成单细胞悬液。
离心并去除上清液。用铺板培养基重悬细胞。
将细胞接种到多孔板中经多聚-D-赖氨酸包被的盖玻片上。赖氨酸可增强细胞贴附。
将铺板培养基更换为含有神经元存活所需营养物质的神经元维持培养基。
用含有阿糖胞苷（arabinosylcytosine，简称 Ara-C）的维持培养基更换一半的培养液。
Ara-C进入细胞后选择性抑制非神经元细胞的生长，导致这些细胞死亡。
更换为新鲜的维持培养基，以支持神经元的存活。
为分离海马神经元进行培养，将蛋白酶溶液解冻，并将铺板培养基预热至37摄氏度。接着，用SLDS冲洗解剖得到的海马组织，然后去除SLDS，加入2毫升蛋白酶溶液，在37摄氏度下孵育15分钟。
随后，用5至10毫升铺板培养基将海马体外植体清洗两次，并加入5毫升铺板培养基。使用带有1毫升塑料吸头的移液器产生轻微涡旋，将海马体外植体解离成单细胞。上下吹打约40次，避免产生氧气气泡，直至溶液变浑浊且无明显的大块外植体残留。
接下来，以1,125 × g 离心细胞3分钟。移去上清液，保持细胞浸没在培养基中，然后将细胞重悬于145毫升铺板培养基中。随后，每孔加入1毫升细胞悬液至24孔板中。将细胞在铺板培养基中于37°C孵育2至4小时。
随后，移除铺板培养基，并更换为新鲜的维持培养基。两天后，将一半培养基更换为含有2 µM阿糖胞苷（Ara-C）的维持培养基，以抑制成纤维细胞、内皮细胞和胶质细胞的生长。接着，在细胞暴露于阿糖胞苷（Ara-C）两天后，再次更换为新鲜的维持培养基。