视网膜神经节神经元与嗅鞘胶质细胞的共培养

取大鼠的视网膜，即眼睛中包含视网膜神经节细胞（RGNs）的感光层。

将视网膜置于冰冷的平衡盐溶液中，以防止组织损伤。

将视网膜转移至含有蛋白酶和DNase的溶液中，并将其切割成更小的组织块。

将内容转移至离心管中并孵育。

蛋白酶可降解细胞外基质并使细胞松散，而DNase则降解任何污染的DNA。

用移液器上下吹打以分散细胞团块。

加入抑制剂溶液以终止蛋白酶的作用。

离心细胞使其沉淀。弃去上清液，并将细胞重悬于合适的生长培养基中。

将该细胞悬液加入嗅鞘施万细胞（OEG细胞）的单层培养物中，OEG细胞是一种胶质细胞，然后进行孵育。

RGNs 整合到 OEG 单层中，建立共培养模型，用于评估 OEG 的神经再生潜力。

将视网膜置于预先准备好的含有5毫升冷EBSS的P-60细胞培养皿中。然后，将其转移至含有重组木瓜蛋白酶、50微升APV、250微升DNase和5微升APV的P-60细胞培养皿中。

用解剖刀将视网膜切成小块。将组织块转移至一个15毫升的塑料离心管中，在37摄氏度、5%二氧化碳的湿润培养箱中孵育30分钟，每10分钟轻轻振荡一次。用玻璃巴斯德吸管反复吹打，使细胞团块分散。然后，将细胞悬液在200 × g 条件下离心5分钟。

弃去上清液，将细胞沉淀重悬于含有150微升DNase和30微升APV的白蛋白-卵黏蛋白蛋白酶抑制剂中。

小心地将细胞悬液加入 5 毫升白蛋白-卵黏蛋白蛋白酶抑制剂中，然后重复离心。离心的同时，彻底移除 OAG 24 孔板中的 ME-10 培养基，并用 500 微升 NBB-27 培养基替换每孔中的培养基。

弃去上清液，将细胞重悬于 2 毫升 NBB-27 培养基中。取 100 微升视网膜细胞悬液，接种至 M24 培养板的每孔中，孔内需预先放置 PLL 包被或 OEG 单分子层盖玻片。

在 NBB-27 培养基中，于 37 摄氏度、5% 二氧化碳条件下培养 96 小时。