0 次观看 • 3:49 分钟 • July 8th, 2025
取大鼠头部肌肉，切成碎片。
加入蛋白水解酶混合物，并在温和振荡条件下孵育。
这些酶消化组织的细胞外基质，使肌纤维松散。
加入含有血清蛋白的培养基以灭活酶。
将组织转移至离心管中，离心后弃去上清液。
用培养基重悬组织。重复机械性解离和离心两次，以获得均一的卫星细胞悬液——这些干细胞对肌肉修复和再生至关重要。
收集含有卫星细胞的上清液。
通过细胞筛过滤以获得单细胞悬液。离心后弃去上清液，将细胞重悬于培养基中。
将细胞悬液滴加到包被有细胞外基质蛋白的腔室载玻片孔中。
包被的表面有助于卫星细胞的贴附。向孔中加入培养基。
培养基中的生长因子诱导卫星细胞增殖并分化为成肌细胞——即肌细胞前体细胞，这些细胞进一步增殖并融合形成多核的肌管。
肌管最终成熟为肌纤维。
为分离卫星细胞，将每块肌肉转移至六孔板的各个孔中，并将组织切成约2毫米的小块，注意不要过度剪碎肌肉。接着，每孔加入2.5毫升0.1%的蛋白酶溶液，在37摄氏度下轻柔振荡孵育60分钟，每20分钟轻轻摇动一次。
当纤维束呈现松散状态时，向每孔加入 2.5 毫升 DMEM，DMEM 中添加马血清和抗生素，并将消化后的组织转移至各自的 15 毫升锥形管中。离心收集组织悬液，弃去上清液。然后，向每根试管中加入 5 毫升培养基，用 10 毫升塑料移液管充分吹打匀浆组织。
再次离心组织，将上清液转移至新的15毫升锥形管中。然后向管中加入5毫升培养基，再次吹打组织块，直至碎片能轻松通过移液管。
再次离心后，将上清液收集到相应的合适试管中，并通过40微米滤网将细胞悬液过滤至各自的50毫升试管中。用1毫升DMEM洗涤滤网，以最大限度回收细胞。然后离心沉淀细胞。将细胞沉淀重悬于新鲜培养基中，并进行细胞计数。
为了培养分离得到的卫星细胞，接下来将细胞悬液稀释至每10微升培养基中含有1.5 × 103个细胞。然后，将10微升细胞悬液分别加入预先制备好的细胞外基质凝胶点上，并将凝胶置于37摄氏度下孵育。六小时后，向每个凝胶点小心加入400微升培养基，并将载玻片重新放回培养箱中。三天后，通过更换为适当的培养基启动细胞的分化过程。