一种从大鼠头部肌肉组织中分离卫星细胞的技术

0 次观看3:49 分钟 • July 8th, 2025

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鼠头肌肉开始,将其切成碎片。

加入蛋白水解酶混合物,轻轻摇晃孵育。

消化组织的细胞外基质,松弛肌肉纤维。

加入含有血清蛋白的培养基以灭活酶。

组织转移到管中,离心,然后丢弃上清液。

将组织重悬于培养基中。重复机械破坏和离心两次,以获得卫星细胞的均匀悬浮液——对肌肉修复和再生至关重要的干细胞。

收集含有卫星细胞的上清液。

通过

细胞过滤器获得单细胞悬液。离心,弃去上清液,并将细胞重悬于培养基中。

细胞悬液滴到细胞外基质蛋白质包被的腔室载玻片孔上。

涂层表面便于卫星细胞的附着。将培养基添加到孔中。

培养基中的生长因子诱导卫星细胞增殖并分化为成肌细胞(肌肉细胞前体),成肌细胞进一步增殖和融合形成多核肌管。

肌管最终成熟为肌纤维。

为了分离卫星细胞,将每块肌肉转移到六孔板的单独孔中,并将组织切成 2 毫米的小块,注意不要将肌肉切碎太多。接下来,将组织片段在每孔 2.5 毫升 0.1% 前列腺酶溶液中在 37 摄氏度下小心地孵育 60 分钟,轻轻摇晃,每 20 分钟一次。

当纤维束表现出松散的外观时,向每个孔中加入2.5毫升DMEM,补充马血清和抗生素,并将消化的组织转移到单独的15毫升锥形管中。旋转组织浆液,并倒出上清液。然后,向每个管中加入5毫升培养基,并用10毫升塑料移液器均质化组织。

再次旋转组织并将上清液转移到新的 15 毫升锥形管中。然后,向试管中再加入 5 毫升培养基,并再次研磨组织碎片,直到碎片轻松通过移液器。

再次离心后,将上清液汇集到适当的相应管中,并通过40微米过滤器将细胞悬液过滤到单独的50毫升管中。用 1 毫升 DMEM 洗涤过滤器,以获得最大的细胞回收率。然后,旋转细胞。将沉淀重悬于新鲜培养基中并计数细胞。

为了培养分离的卫星细胞,接下来,将细胞悬液稀释至每10微升培养基1.5 x 103个细胞。然后,将 10 微升细胞添加到每个先前制备的细胞外基质凝胶点上,并在 37 摄氏度下孵育凝胶。六小时后,小心地向每个凝胶点加入 400 微升培养基,并将载玻片放回培养箱。三天后,通过添加适当的培养基开始细胞的分化。

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最后更新:1 八月 2026