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神经科学
0 次观看 • 4:02 分钟 • July 8th, 2025
取一种能够分化为多种细胞类型的鼠胚癌细胞悬液。
将种子细胞接种于含有培养基和视黄酸的疏水培养皿中。
孵育。疏水表面可防止细胞黏附，导致细胞形成聚集体。
视黄酸进入细胞聚集体，激活信号通路，诱导其分化为神经前体细胞。
孵育后，收集细胞聚集体。
弃去培养基。
加入含有视黄酸的培养基，并将细胞团接种到疏水性培养皿中。
孵育。视黄酸可促进细胞持续分化为神经元。
收集聚集体并移除培养基。
加入蛋白水解酶以破坏聚集体内的细胞间黏附。
加入含血清的培养基以终止酶活性。
机械性地解离聚集体，形成神经元悬液。
离心并弃去富含酶的上清液。
用培养基重悬神经元，并将其接种到含有培养基的贴壁多孔板中。
孵育。神经元贴附于培养板并成熟，伸出长的突起。
进行聚集体生成时，首先在100毫升未经处理的培养皿中加入10毫升添加了5微升视黄酸（RA）的分化培养基。将100万细胞接种至培养皿中，并在37摄氏度和5%二氧化碳条件下孵育两天，以促进聚集体形成。
孵育结束后，用10毫升移液器吸取含有聚集体的培养基，转移至室温下的15毫升离心管中。静置1.5分钟，待聚集体沉降至管底，然后弃去上清液。
加入10毫升新鲜分化培养基，其中添加0.5微摩尔的视黄酸（RA）。将细胞团块轻柔接种至新的100毫米未处理培养皿中，在37摄氏度及5%二氧化碳条件下培养两天。
首先，使用10毫升移液管将细胞团转移至15毫升离心管中。室温静置1.5分钟，待细胞团沉降至管底，然后弃去上清液。用不含血清和抗生素的DMEM洗涤细胞团，再次静置使细胞团沉降至管底。弃去上清液，加入2毫升0.25%胰蛋白酶EDTA。
将试管置于37摄氏度水浴中孵育10分钟，每隔2分钟轻敲一次，以保持细胞悬浮状态。随后加入4毫升维持培养基以终止胰蛋白酶活性，并使用1毫升移液器上下吹打20次。
最后，在200 × g 和室温下离心细胞5分钟。弃去上清液，并将细胞沉淀重悬于5毫升维持培养基中。使用细胞计数器测定细胞数量，随后进行细胞接种。接种细胞时，首先向六孔培养板的每孔加入3毫升维持培养基，然后以每孔500,000个细胞的密度接种细胞。将培养板置于37°C、5%二氧化碳条件下孵育。