利用视黄酸将类胚体细胞诱导分化为神经前体细胞

从培养在成纤维细胞饲养层细胞上的胚胎干细胞开始，该饲养层可维持干细胞的未分化状态。

加入胰蛋白酶和EDTA以破坏细胞间黏附并使细胞脱离。

随后加入富含血清的培养基以终止酶活性，并将细胞悬液转移至离心管中。

离心收集细胞，弃去上清液，然后将细胞重悬于含有视黄酸的培养基中。

将该细胞悬液的液滴置于非黏附性培养皿的底部。

将基底倒置，形成悬滴，并将其置于装有缓冲液的培养皿盖上方，以防止液滴干燥。

在悬滴中，重力使细胞沉降到液滴底部，并最终聚集形成称为拟胚体的三维结构。

此外，细胞吸收视黄酸，后者可调节多种细胞内信号通路。

这种调控可刺激干细胞分化为具有产神经元能力的神经前体细胞。

通过在37摄氏度、5%二氧化碳条件下使用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化2至5分钟，收集胚胎干细胞以启动拟胚体形成。向正在脱落的细胞中加入含有15%胎牛血清（FBS）的新鲜Iscove改良Dulbecco培养基（IMDM），然后将细胞悬液转移至15毫升离心管中。

在室温下以 160 × g 离心 5 分钟。然后使用血细胞计数板对细胞进行计数，并在含 0.5 微摩尔视黄酸的 IMDM 培养基中制备浓度为每毫升 5 × 10⁵ 个细胞的细胞悬液。接着使用 8 通道移液器和 200 微升吸头，将每滴 120 微升的细胞悬液滴加至 100 毫升培养皿中。将培养皿倒置，并在倒置的皿盖中加入 PBS，以防止悬滴干燥。在 37 摄氏度、5% 二氧化碳条件下培养 3 至 4 天。