少突胶质前体细胞体外转导诱导髓鞘化检测方法

取处于生长培养基中的贴壁培养的原代少突胶质前体细胞，即 OPCs。

将对照慢病毒载体加入对照孔，将编码调控髓鞘形成的信号蛋白的待测载体加入待测孔，然后进行孵育。

细胞会内化这些载体，病毒RNA被逆转录为DNA并整合到宿主基因组中，从而在测试细胞中表达信号蛋白。

加入酶以使少突胶质前体细胞从底物上脱离。

中和酶并离心以去除酶。

加入生长培养基，将少突胶质前体细胞（OPCs）转移至含有已贴壁背根神经节（DRG）神经元的微孔板内的盖玻片上。让OPCs沉降。

加入培养基至各孔中，并进行培养。与背根神经节神经元相互作用可诱导少突胶质前体细胞成熟为少突胶质细胞。

表达的信号蛋白诱导少突胶质细胞在背根神经节神经元周围形成髓鞘。

与对照载体转导的细胞相比，评估信号蛋白诱导的测试细胞中髓鞘的形成情况。

本实验方案中，将原代少突胶质细胞前体细胞（OPCs）在含有以下生长因子——CNTF、PDGF、NT3 和佛司可林——的 10 毫升 SATO 培养基中，接种于 10 厘米培养皿中进行培养。细胞需在 8% 二氧化碳条件下培养 24 小时。

首先吸出培养基并彻底去除。然后加入 10 毫升含有生长因子的相同培养基。将所需体积的慢病毒液滴缓慢加入培养基中，以感染少突胶质前体细胞（OPCs），从而表达目标蛋白。

此外，在另一个 OPC 培养板中，将仅表达 GFP 的对照慢病毒加入培养基中。继续培养细胞 48 小时，然后从培养板中收集 OPC，用于接种至培养的 DRG 神经元上。

首先，用 8 毫升 EBSS 将每块培养板冲洗两次。用 9 毫升预热的 EBSS 配制 1 毫升 0.05% 的胰蛋白酶-EDTA 溶液。向每块培养板中加入 5 毫升稀释后的胰蛋白酶溶液。在 37 摄氏度孵育最多两分钟。加入 5 毫升含 30% FBS 的 EBSS 以中和胰蛋白酶。

然后，使用10毫升移液管将少突胶质前体细胞从培养板表面冲洗下来。每次将培养板旋转四分之一圈，以收集全部细胞。将细胞悬液转移至15毫升离心管中。在室温下以180 × g离心15分钟 g。

现在，吸除上清液，并将细胞沉淀重悬于1毫升不含生长因子的温热SATO培养基中，然后计数细胞。接着，准备培养在22毫米盖玻片上的DRG神经元，通过完全吸除其培养板中的培养基来进行下一步操作。

然后，将200,000个OPC以滴加方式轻柔地接种到每个盖玻片上。每个盖玻片的接种体积必须少于200微升。让细胞自然沉降，期间不要移动培养板。10分钟后，向每孔补充1毫升预热的SATO培养基。现在，将剩余的同源OPC重新接种至含有生长因子的SATO培养基中。这些细胞可用于后续验证目的蛋白的表达。