神经元细胞培养用胶原涂层分隔培养皿的制备

首先向培养皿中加入胶原蛋白溶液。

溶液的酸性 pH 值可防止胶原基质形成。

去除多余的溶液。

将培养皿放入托盘中，并放入一块浸有氢氧化铵的纱布垫。盖上盖子以防止氨气挥发。

这些蒸汽会提高 pH 值，中和酸性环境。

中和作用可消除胶原蛋白分子之间的静电排斥，使其能够形成稳定的基质。在中心区域横向划出划痕。

在分室腔室的底部涂抹一层惰性润滑脂。

现在，将培养皿的划痕面连接到腔室上。

翻转并涂抹润滑脂以密封中央隔室。

加入培养基以检查是否泄漏。用润滑脂密封泄漏处。

这形成了一个三室系统：中间室用于神经元细胞，两侧室用于肿瘤。 

神经元细胞沿划痕生长至侧室隔间，并在轴突上形成髓鞘，从而促进肿瘤细胞相互作用的研究。

组装隔室化培养皿时，将胶原蛋白储备液用无菌蒸馏水稀释至500微克/毫升，并充分混匀。使用无菌移液管，向一个35毫米培养皿中加入2毫升稀释后的胶原蛋白溶液。然后将培养皿略微倾斜，吸出溶液，留下一层薄薄的胶原蛋白膜。将剩余溶液转移至下一个35毫米培养皿中。重复此过程，根据需要补充胶原蛋白溶液，直至所有培养皿均完成包被。

在超净工作台中使胶原蛋白聚合，用3毫升浓氨水浸湿纱布垫，覆盖培养皿15分钟。取出纱布垫，让35毫米培养皿干燥。接下来，使用金属锉将18号针头的尖端锉平，制成钝头。将针头浸泡在70%乙醇中以灭菌。在分隔腔室的底部涂抹硅脂，确保硅脂涂抹整齐，并在所有角落处重叠覆盖。

该技术可能具有较大挑战性，因此我们建议您额外留出时间练习涂抹适量的润滑脂，以便在组装隔室培养 chamber 时确保轴突的正常生长。操作过程中务必保持缓慢平稳。建议组装的 chamber 数量应多于预计所需，以便在出现意外情况时有备用。

取下35毫米培养皿的盖子。将培养皿倒置，使划痕区域对准腔室。用镊子轻轻敲击培养皿底部，使其贴合。

涂抹油脂室时，不要用力敲击培养皿，否则轴突将无法在下方生长至相邻的腔室中。

使用止血钳轻轻将培养皿翻转。松开止血钳。在中央隔室底部放置一小堆硅脂。向每个腔室中加入添加物的神经元基础培养基。检查是否有泄漏，必要时用硅脂密封泄漏处。