从鸡胚中分离颅部神经褶以培养神经嵴细胞

取一个由滤纸框支撑的鸡胚，置于解剖显微镜下。

去除包裹胚胎的保护性结构——卵黄膜。

识别位于视叶后方、心形区（成熟心脏的胚胎前体）前方的中脑神经褶。

神经褶含有未迁移的神经嵴细胞，这些细胞是多能干细胞，在发育过程中会转化为迁移性细胞。

这些迁移细胞可分化为神经元和非神经元细胞。

切除神经褶最背侧的部分，并将组织转移至含有缓冲液的培养皿中。

接下来，将涂有黏附蛋白的盖玻片放入含有培养基的培养板孔中。

将神经褶转移至包被的盖玻片上。孵育以促进组织贴附。

在培养过程中，迁移性神经嵴细胞从神经褶迁移至包被的表面，从而建立神经嵴细胞培养物。

将胚胎转移至含有林格氏青链霉素溶液的洁净培养皿中。轻轻前后晃动胚胎，以清除遮挡视野的卵黄，并在溶液变浑浊时更换林格氏青链霉素溶液或将胚胎转移至新的培养皿中。在解剖显微镜下，将胚胎背侧朝上、框架侧朝上放置。将胚胎保留在纸质框架上，以保持其伸展并固定位置。

然后，用镊子去除卵黄膜，以暴露神经褶。取材范围应包括视泡扩展部位后方至菱脑区域，且该区域的菱脑节段收缩刚开始出现。使用弹簧剪仔细切除中脑神经褶。注意切除神经褶最背侧的部分，尽量减少神经管和非神经外胚层的污染，并使用经含卵黄的林格氏青链霉素溶液润洗过的P20移液器或无菌玻璃巴斯德移液管，将神经褶转移至盛有林格氏青链霉素溶液的洁净培养皿中。

在继续解剖其他皱褶时，将已收集的皱褶置于冰上保存。从培养箱中取出培养皿后，使用移液器或巴斯德移液管从盖玻片培养皿或孔中移除纤连蛋白溶液。用含青霉素-链霉素的林格氏液冲洗纤连蛋白包被的基质后，向培养皿或孔中加入适量的完全培养基。

为防止组织粘连，使用 P20 或 P200 移液器，用含卵黄的 Ringer's Pen-Strep 溶液润洗移液吸头。然后将分离的神经褶转移至经纤维连接蛋白包被的盖玻片中央，注意尽可能少地转移 Ringer's Pen-Strep 溶液。在让外植体静置 10 至 15 分钟后，缓慢而小心地将含有神经褶的培养皿移入 38 摄氏度的湿化培养室中。