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神经科学
0 次观看 • 4:39 分钟 • July 8th, 2025
取一只小鼠幼崽的大脑皮层。
加入一种可消化组织细胞外基质的蛋白水解酶，然后通过机械法解离组织，使细胞松散。
加入胶质细胞培养基和DNase以降解任何污染的DNA。
通过机械分离组织以释放神经元和胶质细胞。
待未消化的组织沉淀后，收集含有细胞的培养基并进行离心。弃去上清液。
用胶质细胞培养基重悬细胞，并将其接种至包被有细胞外基质蛋白的培养瓶中。
孵育。星形胶质细胞对包被表面的黏附能力比其他细胞更强。胶质细胞培养基仅促进胶质细胞的存活。
更换培养基以去除碎片。
振荡孵育以分离上层的少突胶质前体细胞（OPCs）和小胶质细胞。
将含有细胞的培养基转移至培养皿中。
振荡孵育以促进小胶质细胞的差异性黏附。
将非贴壁的少突胶质前体细胞（OPC）上清液转移至多聚-D-赖氨酸包被的多孔板中。孵育以促进OPC贴壁。
用 OPC 培养基替换原有培养基，以促进 OPC 生长。
向每管组织中加入1毫升含0.53毫摩尔EDTA的0.05%胰蛋白酶。用10毫升移液管将混合物吹打约20次。然后，将细胞悬液转移至一个空的50毫升锥形管中。
将溶液在37摄氏度和5%二氧化碳条件下孵育15分钟，在8分钟后轻轻振荡裂解物。孵育结束后，向每根试管中加入5毫升MGM和200微升DNase-I，使其终浓度为50微克/毫升。用10毫升移液器对每份裂解物进行10次吹打混匀。
然后，将细胞悬液在室温下静置3分钟，使未解离的组织沉降至管底。将细胞悬液转移至新的50毫升锥形管中，留下未解离的组织。离心后，用5毫升MGM重悬细胞沉淀，并吹打20次。
将细胞悬液接种至包被的 T-25 培养瓶中，在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳条件下培养细胞。为进行少突胶质前体细胞分离，将培养瓶震荡 15 小时，随后收集上清液并将其转移至无菌培养皿中接种。
将上清液在37摄氏度和5%二氧化碳条件下孵育30分钟，15分钟后轻轻摇晃以去除残留的小胶质细胞。移除非贴壁细胞的上清液。计数细胞，并以所需浓度将细胞接种至聚-D-赖氨酸包被的表面。
将细胞放回培养箱中孵育至少1小时。然后，轻柔吸出95%的培养基，缓慢加入预热的OPC培养基，沿孔壁用移液枪缓慢滴加，以尽量减少对OPC的扰动。