0 次观看 • 3:37 分钟 • July 8th, 2025
为尽量减少神经干细胞培养中的污染，应使用配备层流罩、缓冲室、操作室和显微镜室的设施，各房间之间以气密门隔开。
现在，向培养箱中的培养皿内加水以维持湿度。
将缓冲室、处理室和培养箱的参数调节至最佳水平。
使用消毒剂和无菌纱布清洁所有表面，以消除微生物污染物。
首先将神经干细胞培养板放入提供过滤空气的超净工作台中。
用浸有乙醇的纱布擦拭培养皿外侧，然后将其转移至缓冲室，该缓冲室可提供经过滤的空气并维持最佳气体浓度。
最后，将培养板通过处理室移入培养箱，并关闭门。
孵育结束后，将培养皿连同一些新鲜培养基移回操作室。
平衡新鲜培养基。
更换培养板中的培养基，并将培养板重新放入培养箱中孵育。
在每个培养箱底部的水盘中放置三个培养皿。向这些培养皿中加入无菌水，并维持其中的水位，因为这对保持培养箱内的相对湿度设定值至关重要。
在图形界面中，点击 培养箱。随后，点击设定点下相对湿度的当前数值，并输入 85%。然后，点击绿色对勾以确认该数值。
接下来，调节缓冲室、处理室以及培养箱的气体设定值，以满足所引入细胞类型的要求。使用无菌纱布和非易燃消毒剂（如基于苯扎氯铵的产品）清洁处理室的表面。
然后，清洁手套以及常接触的表面，例如门把手。随后，用70%乙醇擦拭超净工作台和缓冲间表面，并使其自然晾干。
随后，将细胞培养瓶或培养板放入生物安全柜中，用浸有乙醇的无菌纱布擦拭其外表面。然后，将培养瓶或培养板放入缓冲室，并运行稀释程序。完成后，立即将其转移至相应的培养箱中。
由于培养箱位于工艺腔的后部，可将搁板拉入工艺腔内以放置细胞，避免不必要地或长时间打开培养箱门。
在此步骤中，准备细胞培养基。将培养基容器略微松开盖子，静置 20 分钟，使培养基与系统内的二氧化碳和氧气水平达到平衡。
随后，从孔中移除旧的培养基。对于多能干细胞，移除大部分旧培养基，仅保留少量以防止换液过程中细胞干燥；对于神经干细胞，移除一半的旧培养基。然后向细胞培养板中加入新鲜培养基，并将培养板放回指定的培养箱中。