一种从大鼠脑中分离神经血管单位的方法

从装有大鼠皮质脑组织（大脑最外层）的冷玻璃砂浆开始。

添加含有蛋白酶抑制剂的脑微血管缓冲液或BMB。

现在，上下移动杵以解离组织。

这种激越释放神经血管单位或 NVU，包括微血管、周细胞、神经元和神经胶质细胞。蛋白酶抑制剂阻断释放的蛋白酶，保护微血管。

这种混合物转移到管子中。

加入致密多糖溶液。使用涡流将溶液与其他内容物均匀混合。

离心机。致密的多糖允许 NVU 沉降，其密度比组织碎片更大。

弃去上清液并将NVU重悬于含有蛋白酶抑制剂和多糖溶液的BMB中。

使用涡流混合内容物。

重复离心过程。弃去上清液以去除任何残留的碎屑。

将NVU重悬于BMB中并储存以供进一步分析。

皮质脑组织放入冰镇的玻璃研钵中。然后，加入 5 毫升 BMB 和蛋白酶抑制剂混合物。使用架空动力均质器，将杵插入研钵中，以 3,700 RPM 的速度上下 15 次冲程使脑组织均质化。然后，将匀浆倒入标记的离心管中。在样品之间，使用 70% 乙醇清洁杵。

要进行离心，请将 8.0 毫升 26% 葡聚糖溶液添加到每个含有脑匀浆的标记离心管中。将管子倒置两次，然后彻底涡旋样品。使用多个角度对每个样品进行涡旋，以确保脑匀浆溶液与 26% 葡聚糖溶液充分混合。将样品在 5,000 g 和 4 摄氏度下离心 15 分钟。

吸出上清液并将沉淀重悬于 5.0 毫升 BMB 和蛋白酶抑制剂混合物中。然后，涡旋沉淀以确保充分混合。接下来，向每个离心管中加入 8.0 毫升 26% 葡聚糖并涡旋，如刚才所示。然后，再次离心样品。

使用保温瓶和玻璃移液器吸出上清液，并确保含有脑微血管的沉淀不会被破坏。用蛋白酶抑制剂将沉淀重悬于BMB中，然后再用26%葡聚糖重悬两次。最终离心后，向每个沉淀中加入 5.0 毫升 BMB 并涡旋以重悬样品。