一种从大鼠脑组织中分离神经血管单元的方法

从一个装有大鼠大脑皮层组织的冰冷玻璃研钵开始，大脑皮层是大脑的最外层。

加入含有蛋白酶抑制剂的脑微血管缓冲液（BMB）。

现在，上下移动研杵以解离组织。

这种振荡释放出神经血管单元（NVUs），包括微血管、周细胞、神经元和胶质细胞。蛋白酶抑制剂可抑制释放的蛋白酶，从而保护微血管。

将此混合物转移至离心管中。

加入高浓度的多糖溶液。使用涡旋振荡器将该溶液与其他组分充分混匀。

离心。致密的多糖使得神经血管单元（NVUs）发生沉淀，其密度高于组织碎片。

弃去上清液，将NVUs重悬于含有蛋白酶抑制剂和多糖溶液的BMB中。

使用涡旋振荡器混合内容物。

重复离心过程。弃去上清液，以去除任何残留的碎片。

用 BMB 重悬 NVU，并储存以供进一步分析。

将脑皮层组织放入预冷的玻璃研钵中。加入5毫升含有蛋白酶抑制剂混合物的BMB缓冲液。使用电动匀浆器，将研杵插入研钵中，在3,700转/分钟的转速下上下匀浆15次。然后将匀浆液转移至已标记的离心管中。在处理不同样品之间，用70%乙醇清洗研杵。

进行离心操作时，向每个含有脑匀浆的已标记离心管中加入 8.0 毫升 26% 右旋糖酐溶液。将离心管倒置两次，然后充分涡旋混匀样品。对每个样品采用多个角度进行涡旋，以确保脑匀浆溶液与 26% 右旋糖酐溶液充分混合。在 4 摄氏度条件下，以 5,000 g 离心 15 分钟。

吸去上清液，并将沉淀重悬于 5.0 毫升含有蛋白酶抑制剂混合物的 BMB 中。然后涡旋振荡沉淀，以确保充分混匀。接下来，向每支离心管中加入 8.0 毫升 26% 葡聚糖溶液，并按前述方式涡旋振荡。随后再次离心样品。

使用真空抽滤瓶和玻璃移液管吸除上清液，注意不要破坏含有脑微血管的沉淀物。用含蛋白酶抑制剂的 BMB 重悬沉淀物，然后用 26% 葡聚糖再重复洗涤两次。最后一次离心后，向每份沉淀物中加入 5.0 毫升 BMB，并涡旋振荡以重悬样品。