0 次观看 • 3:43 分钟 • July 8th, 2025
采用一个侧面柔光照明装置，该装置包含一块丙烯酸板，板上装有白色垫片，并在板的一侧边缘安装了白色LED灯。
将含有拟胚体形成培养基的低黏附多孔板置于前方。
将拟胚体（embryoid bodies，EBs）加入培养板中。
LED 光从亚克力板侧面进入，发射出平行光束，从侧向照亮 EBs，实现肉眼可视化。
旋转培养板以产生涡旋流动，使拟胚体汇聚到中心。
用新鲜的 EB 形成培养基替换用过的培养基。
使用宽口移液器吸头收集胚状体（EBs）。
将移液器保持直立，使 EBs 在重力作用下自然沉降。
将拟胚体转移至另一含有神经诱导培养基的低黏附培养板中。
将枪头接触培养基表面。由于液体表面张力，胚胎小体（EBs）会下沉。
培养基中的特定因子启动EBs中的神经分化，形成神经上皮层。
使用厚度为 0.3 至 0.5 厘米、尺寸为 A5 纸张大小的透明亚克力板，并在亚克力板的正反两面贴上白色垫片。接着，在板的边缘安装一排 LED 白色灯，使光线从亚克力板的侧面进入，然后平行射出。
现在，准备一个新的六孔低吸附培养板，每孔加入 2 毫升拟胚体形成培养基。用 1000 微升大孔径吸头将拟胚体连同培养基一起吸出，每孔转移约 100 个拟胚体至六孔低吸附培养板中。
每天更换EB形成培养基时，需加入相同体积的新鲜培养基，并通过使培养皿沿圆形轨道旋转以诱导产生漩涡流动。由于旋转产生的次级流，EBs或类器官会聚集到孔的中央。用移液器缓慢吸取靠近孔边缘的旧培养基，注意不要用力过猛，否则会将EBs一并吸出。随后，加入新鲜培养基以重新悬浮EBs。
进行神经诱导时，准备一个新的6孔低黏附培养板，每孔加入3毫升神经诱导培养基。打开侧方柔光灯，并关闭其他室内光源。现在，使用宽口移液枪头吸取拟胚体（EBs）及培养基，将其转移至已添加神经诱导培养基的6孔板中。随后，将移液枪垂直静置。拟胚体将在重力作用下逐渐沉降，并向移液枪头口处聚集。
当移液器吸头的尖端再次接触液面时，由于液体表面张力的作用，拟胚体迅速沉入培养基中。将样品置于37摄氏度、5%二氧化碳条件下培养24小时。