分析培养的果蝇脑外植体中神经干细胞的再激活

在外界刺激作用下，果蝇（Drosophila）大脑中的神经干细胞（NSCs）会退出静止状态（即细胞周期停滞状态），并重新激活以启动增殖。

取新孵化的 果蝇 幼虫阶段，即神经干细胞（NSCs）自然退出静息状态的时期 体内

抓住口钩和身体以将幼虫切开。

在口钩后方找到脑组织并将其切除。

将脑组织转移至含有培养基的培养板孔中。

在处理孔中，培养基含有待测激素，而对照孔中不含激素。孵育。

在对照条件下，由于缺乏外部刺激，神经干细胞保持静息状态。

在处理过的孔中，激素与特定的神经干细胞受体结合，激活下游信号通路并重新激活神经干细胞。

被激活的NSCs进入细胞周期并进行增殖。

孵育结束后，脑组织即可用于后续分析，以观察神经干细胞的增殖情况，从而验证该激素的再激活潜能。

在解剖显微镜下，使用镊子从第二个玻璃培养皿中的幼虫体内解剖出脑组织，根据需要调整放大倍数，并使用SSM溶液。用一把镊子夹住口钩，另一把镊子在幼虫体中部轻轻夹住，向相反方向拉动，将幼虫分成两部分。解剖15至20个脑组织后，向无菌24孔培养板的一个孔中加入1毫升SSM溶液。使用移液器和无菌吸头将 freshly dissected 脑组织转移至SSM中，随后将含脑组织的培养基在25°C条件下孵育24小时。