使用免疫磁珠分离小鼠原代少突胶质细胞

0 次观看3:06 分钟 • July 8th, 2025

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从小鼠幼崽中获取神经细胞悬液,其中包含未成熟的少突胶质细胞和原代神经元细胞。

使用磁性细胞分选缓冲液重悬细胞,以避免细胞聚集。

加入表面携带抗 O4 抗体的工程化磁性微珠。振荡溶液以确保均匀混合。

孵育以使微珠与少突胶质细胞表面的硫酸化半乳糖脂(O4抗原)结合,而其他细胞则保持未结合或松散结合状态。

用额外的细胞分选缓冲液洗涤混合物。

离心并弃去上清液,然后重悬细胞。

接下来,将与磁珠结合的细胞通过装有滤膜的磁性分离柱,该滤膜可去除较大的细胞团块。

在磁场作用下运行过程中,结合有磁珠的复合物会向磁铁方向移动并附着在管壁上。

洗涤以去除未结合和松散结合的细胞。

从分离器中取出柱子,并用增殖培养基洗涤,以收集原代少突胶质细胞用于后续实验。

计数后,再次离心细胞,并按每 1 × 107 个细胞加入 90 微升新鲜磁性细胞分选缓冲液重悬细胞沉淀。接着,按每 1 × 107 个细胞加入 10 微升抗 O4 磁珠,轻轻弹动混匀细胞悬液。在 4 摄氏度孵育 15 分钟期间,每隔 5 分钟轻轻弹动混匀一次;孵育结束后,按每 1 × 107 个细胞加入 2 毫升磁性细胞分选缓冲液,通过离心洗涤,随后小心使用真空抽吸弃去上清液。

每 1 × 107 个细胞用 500 微升新鲜的磁性细胞分选缓冲液重悬细胞沉淀,并将合适尺寸的磁性微珠分选柱放入相应的磁性分离器中。将一个 40 微米的滤网置于分选柱上,并用 3 毫升磁性细胞分选缓冲液预冲洗滤网,让缓冲液流过分选柱,但避免柱子变干。将细胞加入滤网中,随后用 1 毫升磁性细胞分选缓冲液洗涤一次。

用3毫升磁性细胞分选缓冲液洗涤柱子三次,每次洗涤使用3毫升缓冲液,再用少突胶质细胞增殖培养基洗涤一次。然后,将柱子转移至一个15毫升离心管中,并使用推杆立即冲洗5毫升新鲜少突胶质细胞增殖培养基通过柱子。

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最后更新:15 八月 2026