从小鼠脑实质微动脉制备脑血管内皮管

将小鼠脑腹侧朝上固定在含有缓冲液的硅胶涂层培养皿中。

从大脑中动脉（MCA）所在的半球区域切取组织切片，上段组织需延伸至超出威尔氏环分支点的位置。

将组织固定，使大脑中动脉（MCA）朝上。

去除大脑中动脉（MCA）分支处的小动脉及其软脑膜。

固定软脑膜及其伴随的小动脉。解剖小动脉并去除周围组织。弃去任何远端分支。

将小动脉置于蛋白酶混合液中孵育，以促进血管节段的部分消化。

用缓冲液替换酶，并将消化后的片段转移至显微镜载物台上装有缓冲液的腔室中，显微镜配备有吹打移液装置。

用移液管反复吹打微动脉，以去除松动的外膜和平滑肌细胞，从而获得含有微动脉内皮细胞的完整管状结构。

将脑组织腹面朝上置于含有冷解剖液的灌流槽中，以分离脑实质小动脉。为分离脑实质动脉，需将离体脑组织用钢针固定于培养皿中，培养皿内盛有深度超过50厘米、掺有炭粉的硅胶聚合物涂层，并加入冷解剖液。

使用锋利且对齐的解剖剪，在大脑两侧半球围绕大脑中动脉（MCA）切割出矩形脑组织，确保组织片段的上部超过威尔氏环的分支点。用钢针将脑组织固定在培养皿中，使大脑中动脉朝上。在钢针附近小心地做一浅切口，用小镊子去除软脑膜，从一端轻轻剥离至另一端。

用大头针将从大脑中动脉（MCA）分支出的带有实质小动脉的分离软脑膜小心固定在培养皿中，并仔细解剖实质小动脉。剪除任何残留的远端分支，确保小动脉干净且无附着组织。使用此完整无损的干净动脉进行酶消化。如需要，也可将每根动脉切成两段用于酶消化，以制备内皮管。

对于小动脉节段的部分消化，将完整的小动脉节段放入含有木瓜蛋白酶、二硫赤藓醇、胶原酶和弹性蛋白酶的10毫升玻璃管中，加入1毫升解离液。在34摄氏度下孵育小动脉节段10至12分钟。

为了分离小动脉内皮管，将连接微量注射器的吹打移液管置于腔室内的解离溶液中，并将其尖端靠近已消化的血管段一端。在泵控制器上设定每秒1至3纳升的流速，以实现轻柔的处理时程。在保持100至200倍放大倍率的同时，将动脉段吸入移液管内，然后注入溶液以解离外膜和平滑肌细胞。反复吹打血管段，直至所有平滑肌细胞均被解离，仅剩完整的内皮细胞管状结构。