从小鼠坐骨神经中磁分离雪旺细胞

取酶消化的小鼠坐骨神经纤维后的细胞与碎片悬液。

通过过滤器过滤，去除碎屑。

离心滤液并弃去上清液。

将细胞重悬于含血清的培养基中，并接种至包被有黏附蛋白的培养板上。

孵育以促进细胞贴壁。将培养基更换为施万细胞培养基。孵育以形成施万细胞单层。

移除培养基，并用缓冲液洗涤。加入胰蛋白酶孵育，使细胞脱落。

加入含血清的培养基以终止酶活性。

收集细胞并离心，弃去上清液。

用缓冲液重悬细胞，并加入抗体包被的磁性微珠。

孵育以使抗体结合成纤维细胞糖蛋白。

离心并弃去上清液。用缓冲液重悬细胞，然后将其加载到磁性分离柱中，该柱内含有置于磁力分离器磁场中的铁磁性微球。

磁场保留了与微珠结合的成纤维细胞，从而使施万细胞在流穿组分中被收集。

将消化后的神经转移至50毫升离心管中，在4摄氏度下以188 g 离心10分钟。弃去上清液后，用含有10%胎牛血清和50微克/毫升庆大霉素的10毫升DMEM重悬沉淀。

接下来，将细胞悬液通过100微米的细胞滤筛过滤。在4摄氏度下以188 g 离心10分钟，然后用含有FCS和庆大霉素的4毫升DMEM重悬沉淀。将2毫升细胞悬液分别加入两个经多聚-L-赖氨酸和层粘连蛋白包被的60毫米组织培养皿中。在37摄氏度、5%二氧化碳条件下培养，并在培养箱中静置2天，期间不要扰动培养皿。

将雪旺细胞悬液在 4 摄氏度下以 188 g 离心 10 分钟，每 1 × 10⁷ 个细胞用 90 微升磁性细胞分选缓冲液重悬细胞沉淀。然后，每 1 × 10⁷ 个细胞加入 10 微升 Thy-1 微珠。将重悬液在 8 摄氏度避光孵育 15 分钟。

接下来，向细胞悬液中加入 2 毫升磁性细胞分离缓冲液。在 4 摄氏度下以 300 g 离心 10 分钟后，将沉淀重悬于 500 微升磁性细胞分离缓冲液中。将磁性细胞分离柱置于细胞分离器中，并用 1 毫升磁性细胞分离缓冲液润洗柱子。然后，将细胞上样至柱中，收集流穿液。