从小鼠脉络丛中分离免疫细胞

0 次观看4:13 分钟 • July 8th, 2025

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鼠标的大脑背侧朝上。

在显微镜下,分离大脑半球。拉开皮层,然后拉开海马体,露出侧脑室和第三脑室。

收集两个外侧脉络丛。这些是富含免疫细胞的大脑结构,像长长的面纱一样排列在侧脑室上。

收集第三脑室脉络丛,这是一个具有颗粒表面的短结构。

分离小脑以暴露第四脑室。

收集第四脑室脉络丛,这是一个具有颗粒表面的长球状结构。

所有脉络丛放入装有缓冲盐水的管中,以保持组织完整性。

加入消化酶溶液并在搅拌下孵育。

该酶分解细胞外基质并松弛细胞。

添加合适的缓冲液以灭活酶。

心以沉淀细胞。弃去上清液并将细胞重悬于新鲜缓冲液中以进行进一步分析。

首先,将从 C57 黑色 6 小鼠背侧解剖的大脑放在培养皿中,并将培养皿放在双目放大镜的物镜下方。在使用镊子将大脑固定到位的同时,将另一对镊子的两端向下插入半球之间的中线。

使用镊子,将皮层与胼胝体和海马体拉离隔膜,露出侧脑室和第三脑室的一部分。将脉络丛外侧确定为衬在侧脑室并在两端张开的长面纱。然后,使用细镊子的两端收集外侧脉络丛。小心收集被海马体后褶皱隐藏的三角形后部。

接下来,将皮层与对侧半球的胼胝体和海马体一起拉离隔膜,露出整个第三脑室和对侧脑室。使用细镊子,收集第三脉络丛,该脉络丛被确定为具有颗粒表面的短结构。然后,收集另一个外侧脉络丛。

接下来,将镊子的两端向下插入小脑和中脑之间,将小脑与脑桥和髓质分离,露出第四脑室。然后,将第四脉络丛确定为一个长而球状的结构,具有颗粒状表面,从右外侧排列在小脑和髓质之间的第四脑室。使用细镊子,收集第四脉络丛。

所有收集的脉络丛与胶原酶IV孵育后,轻轻上下移液约10次以完成解离。然后,用MACS缓冲液填充管至1.5毫升,以停止胶原酶IV活性。接下来,离心细胞并弃去上清液,然后用 1.5 毫升 MACS 缓冲液洗涤细胞。加入适当的补偿珠和抗体溶液后,将样品在冰上孵育 30 至 45 分钟,保护它们免受光照。然后,用 1.5 毫升 MACS 缓冲液填充试管。

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最后更新:1 八月 2026