0 次观看 • 4:13 分钟 • July 8th, 2025
将小鼠的大脑背侧朝上放置。
在显微镜下,分离大脑半球。移开皮层,然后移开海马体,以暴露侧脑室和第三脑室。
采集两个侧脑室脉络丛。这些是富含免疫细胞的脑结构,沿着侧脑室排列,形似长长的面纱。
采集第三脑室脉络丛,该结构较短,表面呈颗粒状。
分离小脑以暴露第四脑室。
采集第四脑室脉络丛,其为一长椭圆形结构,表面呈颗粒状。
将所有脉络丛组织置于含有缓冲盐溶液的离心管中,以维持组织完整性。
加入消化酶溶液,并在振荡条件下孵育。
该酶可降解细胞外基质并使细胞松散。
加入适当的缓冲液以使酶失活。
离心以沉淀细胞。弃去上清液,并将细胞重悬于新鲜缓冲液中,用于后续分析。
首先,将从 C57 black 6 小鼠中分离出的脑组织背侧朝上置于培养皿中,并将培养皿放置在双目放大镜的物镜下方。用镊子固定脑组织,同时将另一把镊子的两个尖端沿大脑半球之间的中线插入。
用镊子将带有胼胝体和海马的皮层从隔区拉开,暴露侧脑室和部分第三脑室。侧脑室内的脉络丛呈长条状薄膜,两端展开,沿侧脑室壁分布,可据此辨认。然后用精细镊子的两个尖端夹取侧脑室脉络丛。注意收集被海马后褶遮蔽的三角形后部区域。
接着,将对侧半球的皮层、胼胝体和海马从隔区拉开,以充分暴露整个第三脑室及对侧侧脑室。使用精细镊子,采集第三脉络丛,其为一表面呈颗粒状的短小结构。随后,采集另一侧的侧脑室脉络丛。
接下来,将镊子的两个尖端插入小脑与中脑之间的区域,分离小脑与脑桥及延髓的连接,以暴露第四脑室。然后,识别第四脉络丛:其为一长条状、呈颗粒状表面的卵圆形结构,位于小脑与延髓之间,沿第四脑室从右侧外侧端延伸至左侧端。使用精细镊子采集第四脉络丛。
将所有收集的脉络丛与IV型胶原酶共同孵育后,轻柔地吹打约10次以完成组织解离。随后,用MACS缓冲液补至1.5毫升以终止IV型胶原酶活性。接着,离心细胞并弃去上清液,再用1.5毫升MACS缓冲液洗涤细胞。加入适当的补偿微珠和抗体溶液后,将样本置于冰上避光孵育30至45分钟。然后,用1.5毫升MACS缓冲液重悬细胞沉淀。
本文详细介绍了一种从小鼠脑中分离脉络丛组织的方法,特别针对侧脑室和第四脑室的脉络丛。该方法包括解剖、酶处理以及细胞重悬,以用于后续分析。
从小鼠脉络丛中分离免疫细胞,可精确研究与中枢神经系统疾病模型相关的神经免疫相互作用。该技术有助于神经炎症和神经退行性疾病药物研发中的早期靶点验证和作用机制去风险化。该方法为在与疾病相关的脑区中进行可重复、定量的免疫细胞分析提供了基础。
该免疫细胞分离方案适用于早期发现与临床前研究的交叉领域,可支持针对中枢神经系统(CNS)项目的机制研究和检测方法开发。
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最后更新:29 八月 2026