从新生小鼠脑组织中获取混合胶质细胞培养物

从新生小鼠脑组织开始，将其转移至含有蛋白酶溶液的离心管中。

这些酶可降解组织的细胞外基质并启动细胞解离。

用生长培养基反复清洗消化后的组织，以去除酶。

使用较大直径的移液枪反复吹打组织，将其解离成较小的碎片。

然后，使用更小直径的移液管继续解离组织碎片，制成单细胞悬液。

过滤该悬液以去除细胞团块，获得含有原代神经元及包括小胶质细胞和星形胶质细胞在内的混合胶质细胞群体的单细胞悬液。

将细胞接种于含有培养基的培养瓶中，并进行孵育以促进细胞贴壁。 

随着时间的推移，培养基中神经元生长因子的缺乏会导致神经元死亡。

将耗尽的培养基更换为新鲜培养基。胶质细胞利用营养物质进行增殖，从而生成包含星形胶质细胞和小胶质细胞的混合胶质细胞培养物。

将脑组织转移至含有2毫升0.25%胰蛋白酶-EDTA的50毫升离心管中，在37摄氏度水浴中孵育15分钟。用新鲜培养基通过添加并移除培养基的方式清洗脑组织。完成清洗后，每份脑组织中加入2毫升培养基，通过吹打混悬脑组织进行匀浆。

当脑组织未明显缩小时，更换为孔径更小的移液管。滴定结束时，当悬液变得澄清且无可见组织块，将悬液通过70微米细胞滤筛，以制备单细胞培养物。

然后，向 T75 培养瓶中加入 8 至 9 毫升培养基，每脑接种两个培养瓶，每个培养瓶中加入 1 毫升脑匀浆液。细胞培养至第 16 天进行分离。