0 次观看 • 4:34 分钟 • July 8th, 2025
取一枚处于合适发育阶段的受精鸡卵。
切开卵壳以接触胚胎。
找到并分离出头部，然后将其转移至含有预冷磷酸盐缓冲液的培养皿中。
去除眼睛和下颌。
将皮肤与颅骨表面分离。
接下来，剪切并移除颅骨骨。
清除周围的结缔组织以暴露脑部。
分离前脑。
然后，将小脑从后脑和血管上分离下来。
将小脑转移至预冷的盐缓冲液中。
胚胎小脑包含一层快速分裂的神经祖细胞，这使其成为神经发生研究的重要材料。
将小脑置于组织切片机的平台上。
去除多余的缓冲液并切取小脑。
将预冷的盐缓冲液加入切片上。
将小脑切片转移至含有冰冷盐缓冲液的培养皿中。
在显微镜下，分离单个切片以进行进一步分析。
首先，将受精的棕色鸡蛋置于38摄氏度的孵卵器中孵化，直至胚胎发育至第14天。在胚胎发育第14天时，打开蛋壳以暴露胚胎，并对鸡胚进行断头处理。 在 ovo 将头部放入含有冰冻 PBS 的培养皿中。
在解剖显微镜下，使用标准镊子在每只眼睛后方进行切口，完全切穿组织，取下眼睛和上颌。然后，沿咽部完全切开第二道切口，以取下下颌。接着，使用标准镊子通过剥离的方式去除颅骨表面的皮肤。随后，去除额骨和顶骨，暴露脑组织。
从腹侧去除咽部软骨及附属间充质。随后将脑组织背侧朝上放置，小心去除后脑背侧的间充质，注意勿损伤软脑膜。接着，在中脑与后脑之间的组织完全切开，分离包括小脑在内的后脑部分。在小脑与后脑翼板两侧交界处，均贯穿组织进行切开。完整移除整个小脑，操作过程中需注意保持软脑膜的完整性。
最后，去除正在形成的脉络丛，并将解剖出的小脑转移至冰上预冷的HBSS溶液中。使用刮勺或剪去尖端以扩大开口的3毫升巴斯德吸管，将整个小脑转移至组织切片机的无菌平台上。用移液器吸除多余的液体。
将组织切片机的切割速度设置为其最大值的50%。然后，按所需方向将小脑切成300微米厚度的切片。使用3毫升巴斯德移液管，用冰冷的HBSS覆盖切好的小脑组织。
然后，使用剪去尖端的3毫升巴斯德移液管，将HBSS和脑片转移至含有20毫升冰上预冷的HBSS的60毫米培养皿中。将培养皿置于体视显微镜下，并用光纤光源照明。接着，使用钟表匠镊子分离单个脑组织切片。