小鼠犁鼻器组织的振动切片制备

从位于鼻中隔基部的鼠类犁鼻器（vomeronasal organ，VNO）开始。

这包含一层薄薄的组织，其中含有特殊的嗅觉感觉神经元，可检测信息素。

加入一滴冷溶液至犁鼻器，以防止其干燥。

将每个犁鼻器囊从骨组织和中央骨中分离出来。

去除周围的软骨囊。

将犁鼻器转移至冷的表面，并加入一滴冷溶液以尽量减少组织损伤。

将犁鼻器浸入熔化的琼脂糖中，移动以去除多余的溶液，然后将犁鼻器垂直放置。置于冰上使琼脂糖凝固，从而包埋犁鼻器。

将凝固的琼脂糖倒置，并修剪成所需的形状。

将样品块固定在标本板上。

现在，使用振动切片机对组织进行切片。

将切片置于含有经 pH 调整溶液的充氧 chamber 中，以维持细胞活性，用于后续研究。

将犁鼻器置于体视显微镜下装有冰袋的小型培养皿中，并在此条件下完成后续解剖步骤。接着，用少量预冷的S2溶液冲洗犁鼻器，以防止组织干燥。然后，用中号镊子夹住犁骨后部，分离包裹犁鼻器软组织的软骨囊。操作时应将软骨囊调整至背侧朝上，以便观察到两侧犁鼻器之间的裂隙。

用精细镊子的尖端将两侧软骨状犁鼻器囊从中央骨骼分离，同时保持犁骨后部固定。确保 previously 附着于犁骨的内侧软骨壁已被移除。

去除犁鼻器周围的软骨时，仅使用镊子夹持软骨囊的边缘，并务必小心避免损伤 delicate 感觉上皮。

为去除残留的软骨，将犁鼻器以其弯曲的外侧朝下放置于培养皿底部，并用镊子牢固地固定住一侧的软骨。然后，从后方以非常平缓的角度将第二把精细镊子小心地插入软骨与犁鼻器之间，以松解组织与软骨之间的连接。

为避免损伤感觉上皮，应抓住犁鼻器尾端，缓慢将其从软骨上剥离。一旦犁鼻器从囊膜中分离，需彻底清除所有残留的小块软骨，因为任何残留的软骨碎片都可能在切片过程中导致组织从周围的琼脂糖中脱落。

接下来，在已解剖的第一例犁鼻器上放置一滴冰冻的 S2 溶液，以防止组织损伤。为包埋犁鼻器，将两个小培养皿均注满熔化的 S3 至边缘。随后，将每个犁鼻器浸入琼脂糖中，并水平来回移动数次，以去除其表面的细胞外溶液薄膜及任何气泡。

将犁鼻器垂直放置，使其吻端朝向培养皿底部。随后将两个培养皿置于冰袋上，等待琼脂糖完全凝固。一旦琼脂糖开始凝固，切勿改变犁鼻器的方向，否则会导致组织与周围琼脂糖脱离。

在此步骤中，使用小刮勺将琼脂糖块从小培养皿转移至大培养皿的皿盖中，并将琼脂糖块倒置，使犁鼻器的头端朝上。接着，使用手术刀片将琼脂糖块切成金字塔形状，注意不要损伤包埋的组织。

然后，使用超级胶水将金字塔形的样品块固定在底部样品板的中心位置，并等待约一分钟，使胶水完全干燥。将样品切成150至200微米厚的切片。在解剖显微镜下快速检查切片的形态。随后，将所有切片转移至充氧室中，待用。