在多电极阵列上分离和培养雏鸡胚胎神经元

取一个含有早期胚胎的受精鸡蛋。

对外壳进行消毒并小心地打开。

取出胚胎。解剖头部并将其转移到含有缓冲液的培养板中。取出眼球。

做一个切口并去除皮肤层，露出前脑和中脑。

去除内膜层和血管。解剖前脑并将其转移到带有缓冲液的培养板中。

将组织切成更小的碎片并将它们转移到锥形管中。一旦碎片沉降，取出缓冲液。

加入蛋白水解酶溶液。孵育以消化组织的细胞外基质并松弛神经元。

除去富含酶的培养基，用神经基础培养基洗涤，去除任何剩余的酶。

添加神经基础培养基。机械解离组织以获得神经元悬浮液。

这些神经元接种在涂有细胞外基质的多电极阵列系统上。加入神经基础培养基并孵育。

神经元附着并延伸投射，形成神经元网络。

神经元铺板当天，从-20摄氏度的冰箱中取出一瓶细胞外基质。喷洒 70% 乙醇并放在冰上。一定要在冰上解冻细胞外基质。不要在室温下解冻，因为 ECM 在 0 摄氏度以上聚合。

在BSL-2罩中工作，通过向100微升等分试样中加入300微升冷神经基础培养基，将细胞外基质稀释至25%。然后，使用 P200 移液器将 100 微升 25% 细胞外基质溶液添加到多电极阵列的中心，注意不要接触电极。立即取出ECM，在表面留下一层薄膜。

盖上多电极阵列，放入组织培养箱中，直到准备好接种神经元。通过用70%乙醇对E7鸡蛋的外壳进行灭菌来开始雏鸡神经元分离。从这一点开始保持无菌条件很重要。确保所有器械均使用 70% 乙醇灭菌，并且溶液无菌。使用解剖罩很有帮助，但如果快速进行，则对于解剖并不是绝对必要的。

然后，在取出并斩首胚胎后，切开眼睛周围并取出眼球。接下来，用杜蒙5号细镊子和弹簧剪刀在腹侧切开一个切口，去除皮肤的外层，露出前脑和视盖。小心地剥离并去除剥离膜。

前脑转移到另一个含有HBS的培养皿中，并用弹簧剪刀将其切成约2毫米的小块。使用无菌转移移液器将前脑碎片转移到 50 毫升离心管中。前脑碎片沉入离心管底部后，尽可能多地取出HBS。

接下来，加入1毫升预热的0.5%胰蛋白酶-EDTA，并在37摄氏度下孵育15分钟。使用巴斯德移液器小心地取出胰蛋白酶，不要干扰组织碎片。加入 1 毫升神经基础培养基，让组织碎片沉到底部。取出培养基并重复洗涤后，加入 2 毫升神经基础培养基并轻轻研磨，直到不再看到组织碎片。

用神经基础培养基稀释重悬细胞1至10，并使用台盼蓝染料和血细胞计数器计数活细胞。计数后，以每平方毫米 2,200 个细胞的密度将相关细胞接种在 ECM 涂层的多电极阵列上。