从小鼠胚胎背外侧端脑中分离与培养细胞

取小鼠胚胎置于缓冲液中，分离颅骨以分离出脑组织。

去除脑表面覆盖的脑膜组织。

解剖大脑以分离半球。

从半球中分离出背外侧端脑，并将其转移至一个离心管中。

背外侧端脑富含神经元和神经前体细胞。

离心并弃去上清液。

加入酶溶液。酶可降解组织基质，使细胞松散。

加入含有血清的增殖培养基。血清蛋白可抑制酶活性。

使用移液器通过机械方法解离组织，形成细胞悬液。

离心并弃去含有失活酶和组织碎片的上清液。

用增殖培养基重悬细胞。

将细胞接种至包被有细胞培养基质的微孔板中。

孵育以使细胞贴附于基质。培养基可促进前体细胞增殖。

在培养皿中用冷解剖液取出5至10个E14胚胎的脑组织。使用镊子小心地剥离皮肤和颅骨，分离出脑组织。在体视显微镜下操作时，用解剖镊去除脑膜。随后，在中线处将端脑切开，分离两侧半球。

沿背内侧曲线和皮层-亚皮层边界切取端脑背外侧部分。将端脑背外侧部分转移至含有冰上预冷解剖液的2毫升离心管中，直至所有脑组织完成解剖。完成端脑背外侧部分的显微解剖后，将组织置于15毫升锥形管中。

然后，将含有收集组织和冷解剖液的离心管在 4 摄氏度、340 × g 条件下离心 5 分钟，以沉淀组织。离心后，用移液器吸除上清液，并加入 1 毫升 37 摄氏度的 0.05% 胰蛋白酶-EDTA 进行化学消化。在 37 摄氏度下孵育 15 分钟。

孵育结束后，加入2毫升增殖培养基以抑制胰蛋白酶活性。接着，将玻璃巴斯德移液管的尖端在煤气灯或本生灯上灼烧数秒，使其开口略微缩小。吸取胎牛血清（FCS）以润洗移液管尖端。然后，使用经火焰抛光并用FCS包被的巴斯德移液管，通过反复吹打进行细胞的机械解离，注意避免产生气泡。

将解离的细胞在 4 摄氏度、340 × g 条件下离心 5 分钟。用移液器吸去上清液。然后加入 1 毫升增殖培养基，用移液器重悬细胞。用移液器吸去经多聚-D-赖氨酸预处理的培养板中的 PBS。随后，在培养板底部画一个标记，作为确定零点的参考依据。

第二次用增殖培养基重悬细胞后，使用0.4%台盼蓝溶液对细胞悬液进行1:1稀释。将稀释后的悬液加入计数板腔室，计数未染色的活细胞数量。死细胞会被染成蓝色。用增殖培养基将细胞稀释至每毫升含10⁶个细胞。向24孔组织培养板的每孔中加入500微升细胞悬液，并在37摄氏度、5%二氧化碳条件下培养细胞。