Name: 肠系膜动脉收缩和舒张的研究，使用自动线Myography (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 51 s
Description: 学习使用自动线肌动描记法测量大鼠肠系膜动脉的收缩和舒张反应。该方法通过苯肾上腺素和钙离子评估血管反应性，为心血管研究提供可靠的技术手段。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

本项目获得了美国国立卫生研究院资助编号 R01 HL064761、R25 HL059868、1SC1 HL099139 和 P20 MD000175 的支持。本内容仅由作者负责，不代表美国国立卫生研究院的官方观点。

1. 大鼠肠系膜小动脉的分离
<ol>
 <li>在密闭容器中使用异氟烷麻醉动物，并用酒精擦拭腹部。</li>
 <li>行腹正中切口开腹，暴露肠系膜床。</li>
 <li>使用剪刀切除约85 cm的肠道及其供血血管（即肠系膜上动脉）。近端切口靠近幽门，远端切口靠近回盲部。肠道节段取自深度麻醉的实验大鼠，通过开胸心脏穿刺法处死动物后获取。</li>
 <li>将切除的组织置于涂有涂层的培养皿中，内含PSS溶液，并在室温下进行肠系膜动脉的解剖分离。</li>
 <li>将肠道近端固定在右侧，其余部分以逆时针方向展开固定（即近端在左，供血血管位于肠道远侧）。</li>
 <li>分离第二级和第三级血管分支，并连同一段近端血管一并解剖取出。</li>
 <li>分离静脉并游离动脉（含V形分叉点），通过去除脂肪组织和结缔组织进行清理。操作时应避免直接接触动脉，使用镊子轻柔牵拉，并剪开结缔组织膜进行分离。</li>
</ol>
2. 血管的安装
<ol>
 <li>取两段较短的（约 4 cm）无钨不锈钢丝（40 μm），用精细镊子将其中一段插入每条动脉的管腔内，注意不要损伤内皮。如有必要，可用钢丝尖端打开管腔。若血液自血管流出，表明管腔已成功打开。</li>
 <li>将肌动描记仪腔室中充满生理盐溶液（PSS；mM：115 NaCl，4.7 KCl，1.4 MgSO4.7H2O，5 NaHCO3，1.2 K2HPO4，1.1 Na2HPO4，1.0 CaCl2，20 HEPES 和 5 葡萄糖，pH 7.4），并加入抗坏血酸（100 μM），在 37 °C 下平衡。用镊子小心地将穿线的血管段从培养皿中转移至室温下的腔室内，并将切除的近端血管段转移至肌动描记仪腔室，沿钢丝拉动末端，将其送入血管内。避免拉伸血管。</li>
 <li>将靠近端的钢丝在右侧连接测微计的夹具上，逆时针方向固定在近端固定螺钉下方。用镊子夹住钢丝的自由端，并顺时针方向将其固定在右侧夹具的远端固定螺钉下。确保沿钢丝的血管段位于夹具之间的间隙中，且不与夹具本身接触。</li>
 <li>将夹具旋开，将第二根钢丝与血管平行对齐，并插入血管远端的管腔内。借助已安装的钢丝作为引导，用一个连续动作轻柔地将钢丝穿过血管段的管腔。操作时握住钢丝距离血管约 1 cm 处，以避免在操作过程中拉伸血管，并避免触碰内皮。</li>
 <li>将夹具旋紧，确保第二根安装钢丝从右侧夹具上已固定的第一个钢丝下方穿过。</li>
 <li>将第二根钢丝的近端在左侧连接换能器的夹具上，顺时针方向固定在近端固定螺钉下。</li>
 <li>将钢丝的远端固定在左侧夹具的固定螺钉下，并拧紧以拉紧钢丝。</li>
 <li>安装完成后，在“安装菜单”中重置电机，并开始对血管进行标准化处理。</li>
</ol>
3. 归一化
Auto Dual Wire Myograph 系统-510A 具备自动归一化功能，该功能通过“归一化”菜单进行评估，允许血管在平衡 30 分钟后，根据制造商方案采用标准化程序拉伸至归一化的内周长 37 °C. 然后将指数曲线拟合到内周长压力数据。该步骤用于定义管腔直径（d100）该动脉原本应有的 体内 当处于松弛状态且跨壁压为 100 mmHg 时1大鼠肠系膜动脉的标准化参数如下：
<ol>
 <li>目标跨壁压 = 13.3 kPa (100 mm Hg)。</li>
 <li>时间 = 60 秒；每个归一化步骤的持续时间。</li>
 <li>IC1/IC100 = 0.9（IC1 = 归一化内周长，IC100 = 对应目标压力的内周长）。</li>
 <li>目镜校准 2*Δ (mm/目镜分划单位)；2 delta 出于编程原因。</li>
</ol>
使用显微镜目镜读数测量安装好的肠系膜动脉长度，当目镜中的十字线分别对准血管段的远端和近端时进行读数。具体而言，在解剖显微镜下以最大放大倍数，使用已校准的目镜测微尺测量安装血管段的长度。记录目镜分度下十字线对准血管段远端（a1）和近端（a2）时的读数。这些数值连同血管拉伸前后的显微测微尺读数一并记录，并输入程序菜单中，用于计算拟合曲线以及对应目标跨壁压为100 mm Hg时的内径值。
在我们的研究中，将动脉设定为管腔直径 d1 = 0.9 × d100，此时主动张力达到最大值。大鼠肠系膜动脉的主动张力达到或超过 10 mN 时，被视为实验的理想状态；主动张力较低的组织被弃用。
4. 反应的测量
标准化后，通过执行“标准启动”程序重新激活血管的机械和功能特性，该程序包括反复施加（通常为2或3次）5 μM去氧肾上腺素（PE）以获得可重复的收缩反应。在我们实验室中，典型的“标准启动”包括一系列刺激和洗脱步骤，如下所示：
<ol>
 <li>更换肌动描记室盖，并以95%空气和5% CO2开始通气。</li>
 <li>用新鲜的PSS（含100 μM抗坏血酸）填充室腔。</li>
 <li>用5 μM PE收缩血管5分钟，并用PSS缓冲液洗涤4次。</li>
 <li>最后一次洗涤后，重新向室腔中加满PSS，等待3分钟，然后重复步骤（ii）和（iii）。</li>
</ol>
标准启动后，动脉即可用于实验。通过累积添加浓度递增的CaCl2（0.5 - 4 mM）来评估收缩血管的舒张反应。当使用抑制剂时，需将血管在肌动描记仪腔室中与化合物预先孵育20分钟，并在整个检测过程中保持存在。
5. 数据分析
将血管和力信号的“归一化”数据直接转换为文本数据后，使用 SigmaPlot 11.0 作图程序（Systat Software, Point Richmond, CA）进行分析，并如图 1 所示进行绘图。浓度-反应数据通过程序中 Pharmacology 菜单下的四参数逻辑函数拟合实验数据，计算 EC50 值进行分析。组间和组内比较采用单因素方差分析（ANOVA），当 p &lt; 0.05 时认为差异具有统计学意义。
6. 典型结果：
<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <th>
 参数</th>
 <th>
 Wistar</th>
 <th>
 Dahl盐敏感型</th>
 <th>
 Dahl盐抵抗型</th>
 </tr>
 <tr>
 <td>L100 (μm)</td>
 <td>83.26 ± 2.33</td>
 <td>91.52 ± 4.67</td>
 <td>117.45 ± 8.43*</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>X1</td>
 <td>604.21 ± 41.97</td>
 <td>752.24 ± 85.25</td>
 <td>745.84 ± 110.09</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>r2 </td>
 <td>0.99 ± 0.003</td>
 <td>0.97 ± 0.008</td>
 <td>0.97 ± 0.007</td>
 </tr>
 </tbody>
</table>
*Wistar 与 DR 的 L100 值之间的差异具有统计学意义。Shapiro-Wilk 正态性检验通过（p = 0.588）；方差齐性检验通过（p = 0.237）。
L100 = 安装的血管段在目标跨壁压下的内径。
X1 = 使安装的血管达到其标准化内周长所需的微调定位器设定值（即实验进行时所用的千分尺读数）。
r2 = （Xi, Yi）拟合指数曲线的回归系数。
注意：详细步骤见510A肌动图系统使用手册6。
表1. 来自“标准化菜单”中基础程序的Wistar、DS和DR大鼠肠系膜动脉段标准化参数的示例读数。数值为5只动物的平均值（± 标准误）。*Wistar与DS之间L100值的差异具有统计学意义（p &lt; 0.05）。
<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <th>
 Wistar</th>
 <th>
 DS</th>
 <th>
 DR</th>
 </tr>
 <tr>
 <td>14.2 ± 0.6</td>
 <td>25.8 ± 2.7*</td>
 <td>20.9 ± 1.3*</td>
 </tr>
 </tbody>
</table>
表2. 应用5 μM PE后，从Wistar、DS和DR大鼠分离的肠系膜动脉产生的张力（mN）。报告值为6-8只动物的均值（± SEM）。*与Wistar对照组相比差异显著（p &lt; 0.05）。
<img alt="显示在Ca²⁺浓度实验期间PE张力随时间变化的静息平衡图。" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig1.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图1"> 
图1. 在含1 mM Ca2+的生理盐溶液中，使用丝状肌动描记仪固定中国Wistar大鼠肠系膜动脉后，Ca2+e诱导的PE收缩血管舒张。动脉在37 °C条件下持续通气平衡30分钟，并记录对Ca2+e的反应。图中显示了加入5 μM PE后，再逐步累积加入Ca2+时典型的张力变化曲线。
<img alt="钙浓度变化及洗涤步骤对PE张力随时间变化的影响曲线" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig2.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图2"> 
图2. Ca2+e-诱导的生理盐溶液（含1 mM Ca）中悬挂于张力测定仪上的DS大鼠肠系膜动脉在PE收缩后的舒张反应2+. 动脉在37℃下平衡30分钟 37 °C 持续通气及对 Ca 的响应2+e 测定。添加时的代表性受力轨迹 5 μM PE 后依次累积加入 Ca2+ 如图所示。Ca2+ 与Wistar和DR大鼠的组织相比，该组织的舒张功能严重受损。
<img alt="PE 张力随时间变化的曲线图，显示钙离子浓度对肌肉收缩的影响及洗涤步骤。" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig3.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图 3"> 
图 3. 在含 1 mM Ca2+ 的生理盐溶液中，使用丝状肌动描记器记录糖尿病大鼠肠系膜动脉在苯肾上腺素（PE）收缩后由细胞外 Ca2+e- 诱导的舒张反应。动脉在 37 °C 下平衡 30 分钟，并持续通气，随后测定其对细胞外 Ca2+e 的反应。图中显示的是加入 5 μM PE 后，再逐步累积添加 Ca2+ 的典型张力变化曲线。
<img alt="大鼠研究中钙反应曲线、EC50值柱状图、CaR表达印迹分析。" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig4.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图4"> 
图4. A. [Ca2+]e-反应曲线。B. 通过将数据拟合至四参数逻辑曲线得出的舒张EC50值柱状图。C. 从DR和DS大鼠分离的肠系膜动脉弓中CaR的表达情况。

<ol><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260, 617-619 (1976).</li>
<li>Bevan, J. A., Osher, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+direct+method+for+recording+tension+changes+in+the+wall+of+small+blood+vessels+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Agents+Actions%22%5BJournal%5D)">A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro.</a> Agents Actions. 2, 257-260 (1972).</li>
<li>Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procedures+for+investigating+of+small+vessels+using+small+vessel+myograph%5BTitle%5D)+AND+%22DMT+Danish+Myo+Technology%22%5BJournal%5D)">Procedures for investigating of small vessels using small vessel myograph.</a> DMT Danish Myo Technology. , (2004).</li>
<li>Angus, J. A., Wright, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+to+study+the+pharmacodynamics+of+isolated+large+and+small+blood+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Toxicol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Techniques to study the pharmacodynamics of isolated large and small blood vessels.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 44, 395-407 (2000).</li>
<li>Halpern, W., Mulvany, M. J., Warshaw, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+properties+of+smooth+muscle+cells+in+the+walls+of+arterial+resistance+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mechanical properties of smooth muscle cells in the walls of arterial resistance vessels.</a> J. Physiol. 275, 85-101 (1978).</li>
<li>Lindhorst, J., Alexander, N., Blignaut, J., Rayner, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+hypertension+between+blacks+and+whites%3A+an+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc.+J.+Afr%22%5BJournal%5D)">Differences in hypertension between blacks and whites: an overview.</a> Cardiovasc. J. Afr. 18, 241-247 (2007).</li>
<li>Eley, S. L., Allen, C. M., Williams, C. L., Bukosi, R. D., Pointer, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Action+of+thiazide+on+renal+interstitial+calcium%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Hypertens%22%5BJournal%5D)">Action of thiazide on renal interstitial calcium.</a> Am. J. Hypertens. 21, 814-819 (2008).</li>
<li>Palmer, C. E., Rudd, M. A., Bujoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+interstitial+Ca2%2B+during+sodium+loading+of+normotensive+and+Dal-salt+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Hypertens%22%5BJournal%5D)">Renal interstitial Ca2+ during sodium loading of normotensive and Dal-salt hypertensive rats.</a> Am. J. Hypertens. 16, 771-776 (2003).</li>
<li>Hurwitz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homeostatic+control+of+plasma+calcium+concentration%5BTitle%5D)+AND+%22Crit.+Rev.+Biochem.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Homeostatic control of plasma calcium concentration.</a> Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 31, 41-100 (1996).</li>
<li>Brown, E. M., MacLeod, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+sensing+and+extracellular+calcium+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Extracellular sensing and extracellular calcium signaling.</a> Physiol. Rev. 81, 239-297 (2001).</li>
<li>Breitwieser, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+calcium+as+an+integrator+of+tissue+function%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Biochem.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Extracellular calcium as an integrator of tissue function.</a> Int. J. Biochem. Cell Biol. 40, 1467-1480 (2008).</li>
<li>Mupanomunda, M. M., Wang, Y., Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+chronic+sensory+denervation+on+Ca2%2B-induced+relaxation+of+isolated+mesenteric+resistance+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effect of chronic sensory denervation on Ca2+-induced relaxation of isolated mesenteric resistance arteries.</a> Am. J. Physiol. 274, 1655-1661 (1998).</li>
<li>Mupanomunda, M. M., Ishioka, N., Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interstitial+Ca2%2B+undergoes+dynamic+changes+sufficient+to+stimulate+nerve-dependent+Ca2%2B-induced+relaxation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Interstitial Ca2+ undergoes dynamic changes sufficient to stimulate nerve-dependent Ca2+-induced relaxation.</a> Am. J. Physiol. 276, 1035-1042 (1999).</li>
<li>Mupanomunda, M. M., Tian, B., Ishioka, N., Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+interstitial+Ca2%2B%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Renal interstitial Ca2+.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 278, F644-F649 (2000).</li>
<li>Awumey, E. M., Hill, S. K., Diz, D. I., Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytochrome+P-450+metabolites+of+2-arachidonoylglycerol+play+a+role+in+Ca2%2B-induced+relaxation+of+rat+mesenteric+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cytochrome P-450 metabolites of 2-arachidonoylglycerol play a role in Ca2+-induced relaxation of rat mesenteric arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2363-2370 (2008).</li>
<li>Chen, W., Bergsman, J. B., Wang, X., Gilkey, G., Pierpoint, C. R., Daniel, E. A., Awumey, E. M., Dauban, P., Dodd, R. H., Ruat, M., Smith, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presynaptic+external+calcium+signaling+involves+the+calcium-sensing+receptor+in+neocortical+nerve+terminals%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Presynaptic external calcium signaling involves the calcium-sensing receptor in neocortical nerve terminals.</a> PloS One. 5, e8563-e8563 (2010).</li>
<li>Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+perivascular+sensory+nerve+Ca2%2B+receptor+and+blood+pressure+regulation%3A+a+hypothesis%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Hypertens%22%5BJournal%5D)">The perivascular sensory nerve Ca2+ receptor and blood pressure regulation: a hypothesis.</a> Am. J. Hypertens. 11, 1117-1123 (1998).</li>
<li>Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+Ca2%2B+and+blood+pressure%3A+evidence+that+Ca2%2B-sensing+receptor+activated+sensory+nerve+dilator+activity+couples+changes+in+interstitial+Ca2%2B+with+vascular%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Dietary Ca2+ and blood pressure: evidence that Ca2+-sensing receptor activated sensory nerve dilator activity couples changes in interstitial Ca2+ with vascular.</a> 16, 218-221 (2001).</li>
</ol>

未声明任何利益冲突。

高血压是心血管、脑和肾疾病发病率和死亡率的主要原因。人群中高血压的发病率较高，且在老年人群中盐敏感性高血压的发病率尤其高，黑人中的发病率高于白人。这被认为与黑人肾脏倾向于潴留钠有关9。盐敏感性是肾脏疾病的重要促成因素，且与内皮功能障碍相关，但其机制尚未完全阐明。我们实验室最近的研究发现，高盐饮食会降低盐敏感性大鼠的组织间液Ca2+浓度（[Ca2+]IF），并升高收缩压10,11。这些效应可能归因于肠系膜动脉和肾脏中CaR表达减少。若在盐敏感性高血压患者中也发现CaR水平的类似降低，则可能为开发新疗法提供靶点。我们一直采用自动化丝状肌动图法，利用多种高血压动物模型分离出的肠系膜动脉，研究血管对细胞外Ca2+e的反应性，以阐明血管系统中CaR信号传导的机制。
[Ca2+]e 在人体内维持在一个狭窄的范围内（1.1 - 1.4 mM）12，因此CaR必须能够检测[Ca<s...

<table><tbody><tr><td>Auto Dual Wire 肌小环张力测定系统-510ADMT-USA, Inc.</td><td>美国佐治亚州亚特兰大</td><td>100151</td><td></td></tr><tr><td>&lt;a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/corporate/product/ML866/" target="_blank"&gt;PowerLab/4SP 数据采集系统&lt;/a&gt;</td><td><a href="http://www.adinstruments.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> ADInstruments</a></td><td>&lt;a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/corporate/product/ML866/" target="_blank"&gt;ML750&lt;/a&gt;</td><td>新型号提供 4-16 个输入通道。</td></tr><tr><td>戴尔 Dimension XPS Gen 4 计算机</td><td>Dell</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stemi SV II (Apo) 解剖显微镜（带目镜）</td><td>卡尔·蔡司公司</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Wistar、Dahl盐敏感型、Dahl盐抵抗型大鼠</td><td>哈兰实验室</td><td></td><td></td></tr><tr><td>啮齿类动物饲料</td><td>哈兰实验室</td><td></td><td></td></tr><tr><td>去甲肾上腺素</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>其他化学品</td><td></td><td></td><td>所有使用的化学试剂均为 commercially 可获得的最高纯度级别。</td></tr></tbody></table>

使用自动化的丝线肌动描记法研究肠系膜动脉的收缩与舒张

Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

近端阻力血管（如肠系膜动脉）对周围阻力有显著贡献。这些直径在100-400 μm之间的微小血管主要根据机体的整体需求，调节血液流向各个器官。大鼠肠系膜动脉的直径大于100 μm。肌张力测定技术最初由Mulvay和Halpern1描述，其基础是Bevan和Osher2提出的方法。该技术可在等长条件下提供关于小血管的信息，在此条件下可防止肌肉标本发生显著缩短。由于血管对不同激动剂的收缩力和敏感性依赖于拉伸程度（依据主动张力-长度关系），因此必须在等长条件下进行收缩研究，以避免固定金属丝产生顺应性。优选不锈钢丝而非钨丝，因为后者易发生氧化，从而影响记录的反应3。该技术可用于比较固定血管在激动剂作用下的收缩反应，以获得血管平滑肌细胞受体功能正常的证据。
我们在多项研究中已证实，用苯肾上腺素收缩的离体肠系膜动脉，在加入累积浓度的细胞外钙（Ca²⁺）后会舒张。2+e）。研究结果使我们得出结论：表达G蛋白偶联Ca2+-感受受体（CaR）介导这一血管舒张反应。本文采用自动化的丝线肌张力测定法，结果显示来自Wistar、Dahl盐敏感型（DS）和Dahl盐抵抗型（DR）大鼠的肠系膜动脉对Ca的反应不同2+e. Wistar大鼠的组织显示出更高的Ca2+-敏感性相比DR和DS大鼠有所降低。DS大鼠肠系膜动脉中CaR表达减少与Ca敏感性降低相关2+e诱导的离体预收缩动脉舒张。数据表明，在肾上腺素能张力升高（如高血压状态下）时，钙敏感受体（CaR）是肠系膜动脉舒张所必需的；同时提示Dahl动物模型中存在固有的CaR信号通路缺陷，且在DS大鼠中这一缺陷更为严重。
该方法可用于测定血管反应性 离体 在肠系膜阻力动脉及其他类似的小血管中，不同激动剂和/或拮抗剂之间的比较可轻松且一致地进行并列评估6,7,8.

本文介绍了一种用于离体肠系膜动脉张力测量的自动化肌动图方法。该方法采用Mulvany-Halpern自动双丝肌动仪510A，测定血管对苯肾上腺素和细胞外钙的反应。该技术可独立、一致地测定直径为60 - 300 μm的小血管对激动剂的等长收缩反应。

近端阻力血管，例如肠系膜动脉，对外周阻力具有显著贡献。这些直径在……之间的微小血管

本实验利用对盐敏感和耐盐的大鼠，比较肠系膜阻力动脉在苯肾上腺素张力作用下对细胞外钙的反应性。首先从动物体内分离肠系膜动脉弓，并解剖出阻力动脉分支，以实现上述目的。接着，将一根不锈钢丝穿过解剖所得动脉的一小段，然后将血管安装到张力测定腔室中。然后将第二根不锈钢丝平行穿入血管腔内，与第一根钢丝并列。接着，将安装好的血管拉伸至标准化的内周长。该操作步骤的最后一步是通过重复给予去氧肾上腺素刺激血管，再以累积浓度的钙进行舒张，从而重新激活血管功能。最终，结果显示出血管张力的变化，这些变化可转换为钙反应曲线，并用于确定 EC 50 值。作为比较，我们最初产生使用该方法的想法，是在发现大鼠 Masonary 电池的 nev 网络表达了一种 gpro 铜钙敏受体时。这可以以与苦味AIC受体相同的方式进行研究，后者由激动剂激活。通常，初次接触该方法的研究人员可能会遇到困难，因为血管的内皮层和平滑肌层较薄，血管容易受损。如果发生这种情况，这些血管的机械性能可能会受到影响。首先，准备操作区域和手术器械。将麻醉后的动物仰卧放置，并用酒精擦拭腹部。行正中腹切开术后，用剪刀切除约85厘米长的肠段，包括肠系膜上动脉。近端在幽门附近切断，远端在回盲交界处附近切断。将切除的肠段置于含有生理盐溶液（PSS）的涂覆培养皿中，室温保存。将肠管近端固定于右侧，然后按逆时针方向依次固定其余肠段。接着，游离包含第二和第三分支的肠系膜动脉节段及近端一段肠管。辨认肠系膜动脉的V形分支处，并将其与静脉分离。使用镊子轻轻剥离脂肪组织和结缔组织，以避免直接接触动脉。开始固定血管时，截取两段长约 2 毫米的动脉。可使用 4 厘米长、40 微米直径的无钨不锈钢丝的尖端来打开动脉的管腔。然后使用精细镊子将导丝插入每条动脉的管腔内。注意不要损伤内皮，用37摄氏度的PSS填充肌动血管环装置的腔室。用镊子将穿线的血管段转移至腔室内。接下来，将切除的近端血管段转移至肌动描记仪腔室，并沿导线拉动末端，将其送入血管。避免拉伸血管。将导线近端逆时针固定在连接测微计的右侧钳口的近端固定螺钉下方。用镊子夹住导线的自由端，并将其顺时针固定在右侧夹头的远端固定螺钉下，确保血管段沿导线位于夹头之间的间隙中，且不与夹头本身接触。将夹头旋开。将第二根导线与血管平行对齐，并将其插入血管腔的远端。轻柔地以已固定的导丝为引导，用一个连续动作将导丝穿过血管段的管腔。手持导丝位置距离血管约1厘米，以避免操作过程中牵拉血管，并避免接触内皮层。拧紧夹口，确保第二根固定导丝从右侧已固定的导丝下方穿过。将第二根导线的近端顺时针方向固定在连接换能器的左手夹具的近端固定螺钉下方。将导线的远端固定在左手夹具的固定螺钉下并拧紧，以拉伸导线。安装完成后，于37摄氏度下平衡30分钟。平衡后，从安装菜单中重置电机，并启动归一化程序，该程序将血管拉伸至归一化的内周长。首先打开归一化菜单，将目标跨壁压设置为13.3千帕。接下来，将每个归一化步骤的持续时间设置为60秒。IC1 与 IC100 的比值应等于 0.9，且 IP 校准应设置为双星三角形。使用显微镜目镜读数测量安装好的肠系膜动脉长度，当发丝位于血管段远端和神经元上方时进行读数。标准化后，通过执行一系列刺激和洗脱周期的标准启动程序重新激活血管。首先，盖上肌槽盖，用95%空气和5%二氧化碳开始通气。用含有100 µM抗坏血酸的新鲜PSS填充槽。用5 µM茴香、肾上腺素或PE收缩血管5分钟，然后用PSS缓冲液冲洗4次。最后一次冲洗后，重新用PSS填充槽，等待3分钟，再重新填充PSS并用PE进行收缩。如前所述，此时动脉已准备好进行实验。通过逐步累积增加氯化钙的浓度，测量收缩血管的舒张反应。该表格显示，应用去氧肾上腺素后，Wistar大鼠、Dahl盐敏感型（DS）大鼠与Dahl盐抵抗型（DR）大鼠的基线张力存在差异。来自Wistar大鼠的这条记录显示，去氧肾上腺素收缩的动脉在逐步添加氯化钙后出现舒张，而DS大鼠组织中的这一舒张反应严重受损，与Wistar大鼠相比以及与DR大鼠相比均可见此现象。钙敏感性的差异可通过钙反应曲线体现，同时在计算EC50值时亦可再次观察到。最后，与Dr.Rats相比，DS大鼠动脉中钙敏感受体的表达减少。一旦掌握，该技术可在两小时内完成。观看本视频后，您应能很好地理解如何在等长条件下比较小肠系膜动脉对血管外源性化合物的反应性。

mesenteric-artery-contraction-relaxation-studies-using-automated-wire

Research

科研

JoVE Journal

Medicine

医学

肠系膜动脉收缩和舒张的研究，使用自动线Myography

同时采用膜片钳电生理技术记录分离动脉平滑肌细胞中Kv7（KCNQ）钾通道活性，并结合压力肌动图技术测量血管收缩/舒张反应，可揭示Kv7通道在血管平滑肌生理学和药理学中的重要作用。...

利用膜片钳电生理学和压力肌动图研究动脉平滑肌Kv7钾通道功能

在压力肌动描记术中，将一段完整的小血管段固定在两个微小套管上，并加压至适宜的管腔压力。本文中，我们描述了测定小鼠第3rd C57和sGCα中肠系膜动脉的排序1-/-...

使用压力肌动图评估小鼠阻力动脉功能

压力肌动描记法用于评估小动脉在加压时产生持续性收缩的血管活性。本文提供了一项详细方案，用于评估从大鼠分离的小肠系膜动脉节段的血管活性，以及管腔内压力对血管直径的影响。...

利用压力肌动图评估肠系膜阻力动脉的肌源性反应和血管活性

利用大鼠离体阻力动脉视频显微技术评估血管调控机制

血管环张力测定技术用于研究血管平滑肌功能并筛选新药。本文报道了一种详细方案，用于测定小鼠肠系膜动脉的等长收缩力，并用于筛选血管平滑肌新的舒张剂。...

利用血管环张力测定法测量小鼠肠系膜动脉的等长收缩力

本方案描述了利用导丝肌动图技术评估从小鼠分离的肠系膜动脉的透壁等长张力的方法，特别关注内皮细胞和血管周围脂肪组织释放因子的调节作用。...

利用离体肠系膜动脉评估血管张力反应性：重点关注血管周围脂肪组织的调节作用

本方案描述了使用多腔室肌动图系统在实验中应用张力测定肌动图技术的原理与技术操作 离体...

使用张力测定小体积腔室血管肌动描记法测量小鼠胸主动脉内皮依赖性血管舒张功能

小肠经常暴露于可能影响血流并对其营养吸收产生负面影响的毒素。利用多通道肌动图仪及肠系膜动脉和静脉分离组织，可对感兴趣化合物或毒素的血管活性进行筛选。...

从小牛肠系膜动脉和静脉分离血管段并用作生物测定法检测小肠血管活性

关键词：小牛，肠系膜动脉，肠系膜静脉，血管活性，生物测定，小肠

我们介绍一种手术技术，该技术可在小鼠股动脉中制造钢丝损伤，以诱导内膜增生，从而建立一个用于测试经血管周围递送治疗性化合物以抑制再狭窄的模型系统。...

股动脉导丝损伤联合血管周围药物递送贴片植入的小鼠模型

再狭窄的小鼠股动脉导丝损伤模型在技术上具有挑战性。在本方案中，我们展示了成功实施导丝损伤以诱导稳定 新生内膜，用于再狭窄研究的关键技术细节。...

一种动脉再狭窄的小鼠模型：股动脉导丝损伤的技术要点

学习使用自动线肌动描记法测量大鼠肠系膜动脉的收缩和舒张反应。该方法通过苯肾上腺素和钙离子评估血管反应性，为心血管研究提供可靠的技术手段。

使用自动化的丝线肌动描记法研究肠系膜动脉的收缩与舒张

探索更多视频