Name: 玻璃体内注射眼部疾病模型建立 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T12:45:27.000+00:00
Duration: 5 min 37 s
Description: 学习玻璃体内注射技术用于建立眼部疾病动物模型。本视频演示了以45度角进针避免晶状体损伤的操作方法，帮助研究人员掌握安全有效的眼内给药技术并降低出血风险。

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本实验室对青光眼的研究得到了美国健康助手基金会下属国家青光眼研究项目的资助。

<ol>
<li>使用拉针仪制备玻璃移液管，将其连接至1 ml注射器，并用Parafilm密封连接处。将2 µL溶液吸入移液管尖端，准备进行注射。</li>
<li>通过腹腔注射给予氯胺酮（80 mg/kg）和赛拉嗪（8 mg/kg）（体积比为2:1）以麻醉大鼠。</li>
<li>玻璃体注射前，在大鼠眼睛上滴加一滴0.5%的丙美卡因作为局部麻醉剂。</li>
<li>固定大鼠体位，暴露眼部的上方鼻侧区域。</li>
<li>使用30号针头在平坦部水平穿刺上方鼻侧巩膜。避免接触眼外肌&nbsp;和血管。</li>
<li>轻压眼球，使少量玻璃体经穿刺孔从玻璃体腔后部流出。</li>
<li>将玻璃移液管尖端以45°角经巩膜穿刺孔插入玻璃体腔。向玻璃体后腔注射2 µL溶液，留针数秒后缓慢退出。避免触碰晶状体和眼内血管。</li>
<li>玻璃体注射后，在大鼠眼部涂抹托百士眼膏以预防感染。</li>
</ol>

<ol><li>Chiu, K., Lam, T. T., Ying Ku, W. W., Caprioli, J., Kwong Kwong, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calpain+and+N-methyl-d-aspartate+%28NMDA%29-induced+excitotoxicity+in+rat+retinas%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Calpain and N-methyl-d-aspartate (NMDA)-induced excitotoxicity in rat retinas.</a> Brain Research. 1046, 207-215 (2005).</li>
<li>Fisher, D., Pavlidis, M., Thanos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cataractogenic+lens+injury+prevents+traumatic+ganglion+cell+death+and+promotes+axonal+regeneration+both+in+vivo+and+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Cataractogenic lens injury prevents traumatic ganglion cell death and promotes axonal regeneration both in vivo and in culture.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41, 3943-3954 (2000).</li>
<li>Ji, J. -Z., Elyaman, W., Yip, H. K., Lee, V. W. H., Yick, L. -W., Hugon, J., So, K. -F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CNTF+promotes+survival+of+retinal+ganglion+cells+after+induction+of+ocular+hypertension+in+rats%3A+the+possible+involvement+of+STAT3+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">CNTF promotes survival of retinal ganglion cells after induction of ocular hypertension in rats: the possible involvement of STAT3 pathway.</a> European Journal of Neuroscience. 19, 265-272 (2004).</li>
<li>Lam, T. T., Abler, A. S., Kwong, J. M. K., Tso, M. O. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-Methyl-D-Aspartate+%28NMDA%29-Induced+Apoptosis+in+Rat+Retina%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">N-Methyl-D-Aspartate (NMDA)-Induced Apoptosis in Rat Retina.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 40, 2391-2397 (1999).</li>
</ol>

动物的处理遵循由香港大学教学与研究使用活体动物委员会（CULATR）以及视觉与眼科研究协会关于在眼科和视觉研究中使用动物的声明所批准的动物研究使用方案。

良好的玻璃体内注射对于建立动物模型以及实施直接的眼内治疗具有重要意义。首先，注射部位不应破坏视网膜结构；其次，应避免出血以降低感染风险；第三，应避免触碰晶状体，以防发生外伤性白内障。最重要的是，应尽量减少对正常眼内结构的干扰。

<table><tbody><tr><td>手术显微镜 </td><td>Olympus Corporation</td><td>OME</td><td></td></tr><tr><td>玻璃移液管 </td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>移液管拉制仪 </td><td>David Kopf Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1ml 注射器</td><td></td><td></td><td>一次性使用</td></tr><tr><td>30G 针头</td><td></td><td></td><td>一次性使用</td></tr><tr><td>氯胺酮</td><td>Aldasan</td><td></td><td>麻醉剂</td></tr><tr><td>赛拉嗪</td><td>Aldasan</td><td></td><td>麻醉剂</td></tr><tr><td>爱尔凯因</td><td>Alcon</td><td></td><td>0.5% 盐酸丙帕他卡因</td></tr><tr><td>托百士</td><td>Alcon</td><td></td><td>软膏，3% 妥布霉素</td></tr></tbody></table>

建立眼病模型的玻璃体腔注射法

Intravitreous Injection for Establishing Ocular Diseases Model

玻璃体内注射是视觉科学研究中广泛使用的一种技术，可用于建立眼部疾病动物模型，或作为局部治疗的直接给药方式。本视频介绍了如何使用简单且低成本的工具完成玻璃体内注射操作。实验采用1 ml注射器替代哈密尔顿注射器，并提供了实用技巧，指导如何使用玻璃毛细管制备具有理想尖端的合适注射针头，以及如何将注射器针头与玻璃毛细管紧密连接。
进行一次良好的玻璃体内注射需注意三个方面：1）注射部位不应破坏视网膜结构；2）应避免出血以降低感染风险；3）不应触碰晶状体以防止外伤性白内障。简而言之，最重要的一点是尽量减少对正常眼部结构的干扰。为避免损伤视网膜，选择大鼠眼球的上方鼻侧区域作为注射部位。此外，针头穿刺点位于平坦部，距离大鼠眼球角膜缘约1.5 mm。在注射前，轻轻从穿刺孔挤出少量玻璃体以降低眼内压。采用45°注射角度，可降低大鼠眼发生外伤性白内障的可能性，从而避免相关并发症及晶状体因素的干扰。本操作中无需切开结膜和眼外肌，亦无出血。由于操作快速且创伤轻微，一次成功的玻璃体内注射可在数分钟内完成。
本方案中所述的注射套件专用于玻璃体内注射。然而，本文介绍的方法和材料也可用于向小型哺乳动物的脑、脊髓或其他器官给药的其他注射操作。

玻璃体内注射是视觉科学研究中用于眼部疾病或局部治疗直接给药的常用技术。本视频展示了一种使用1 ml注射器配合玻璃毛细管进行玻璃体内注射的实验方案。同时提供了有关避免大量出血和晶状体损伤的实用技巧。

玻璃体内注射是视觉科学研究中广泛使用的一种技术。它可用于建立眼部疾病动物模型，或作为……

您好，我是来自Guso实验室的TU。今天我将向您介绍如何进行玻璃体腔注射，以建立动物模型或阻止眼部疾病进展。以下是示意图。用于显示红眼内注射针头的位置。将针头以45度角刺入瘢痕表面的后房。采用45度角可避免损伤晶状体。进行玻璃体腔注射时，我们将在手术显微镜下实施眼内注射。动物将通过氯胺酮和赛拉嗪混合物实现麻醉。同时将使用局部麻醉剂和抗生素软膏。我们使用玻璃毛细管进行注射。使用预先准备好的拉针仪来制备玻璃毛细管。然后需要去除玻璃毛细管末端非常尖锐的部分。我们可以将其与100万支注射器连接。使用香水将连接处密封。然后通过此玻璃管，可以缓慢而平稳地吸取两微升（2 µL）注射溶液，并将红色部分置于显微镜下。在表面滴加一滴局部麻醉剂，然后吸除多余液体。使用30 G针头穿刺巩膜。针头垂直于巩膜表面，仅针尖部分刺入。从穿刺孔可见有部分房水渗出。轻轻推动以排出更多房水，从而获得更大的操作空间。在红眼的后房内，将玻璃体穿刺针的针尖以45度角插入玻璃体，方向朝向瘢痕表面。尽量避免损伤晶状体。缓慢注射，切勿将气泡注入眼内。停留数秒后，将针头抽出。然后在眼部涂抹抗生素软膏。玻璃体内注射的主要挑战是尽量减少对眼球的操作。我们需要避免眼内出血、晶状体损伤和视网膜脱离。

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Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

玻璃体内注射眼部疾病模型建立

本视频展示了一种用于研究感染后葡萄膜炎的致敏型分枝杆菌性葡萄膜炎（PMU）小鼠模型的建立方法。通过在先前用相同免疫原致敏的小鼠中进行玻璃体内注射热灭活的结核分枝杆菌（Mycobacterium...

一种用于研究感染后葡萄膜炎的经致敏的分枝杆菌性葡萄膜炎小鼠模型

本视频展示了一种用于检测和量化感染后葡萄膜炎小鼠模型中眼部炎症的体内成像技术。该技术称为光学相干断层扫描（OCT），可生成眼部的高分辨率横断面图像，用于评估疾病进展。...

用于评估小鼠模型中葡萄膜炎的光学相干断层扫描成像

来源：Park, S. W., 等. 小鼠视网膜色素上皮基因治疗中病毒载体的角膜缘入路视网膜下注射。J. Vis. Exp.

小鼠模型中向视网膜色素上皮的视网膜下注射病毒载体

兔子被广泛用于研究眼内药物的药代动力学。本文介绍一种利用兔眼进行眼内药物药代动力学研究的方法。...

兔眼在眼内药物药代动力学研究中的应用

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超高分辨率小鼠光学相干断层扫描技术在视网膜基因治疗研究中辅助眼内注射

本文介绍了一种用于细菌性眼内炎小鼠模型的玻璃体内注射方法及后续细菌定量技术。该方案可进一步扩展用于检测宿主免疫反应以及细菌和宿主基因的表达。...

小鼠细菌性眼内炎模型中的玻璃体内注射及感染参数定量分析

非人灵长类动物（NHP）由于其在解剖结构和遗传上的相似性，是研究人类视网膜细胞治疗的理想模型。本文描述了一种在NHP眼球中进行黄斑下视网膜色素上皮细胞移植的方法，以及预防与黄斑操作相关的术中并发症的策略。...

退行性视网膜疾病非人灵长类动物模型中的视网膜色素上皮移植

本方案概述了在小鼠中诱导 预激活型分枝杆菌性葡萄膜炎（PMU）的步骤。该方法详细说明了在小鼠模型系统中产生可靠且显著的眼部炎症的操作流程。通过使用本方案，我们从单只动物中获得了葡萄膜炎眼及未发炎的对侧眼，可用于后续的免疫学、转录组学和蛋白质组学分析。...

作为感染后葡萄膜炎模型的启动型分枝杆菌性葡萄膜炎（PMU）

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绵羊眼玻璃体内注射

本方案描述了一种通过中央角膜切口和长隧道进入前房的大鼠前房注射技术。该注射方法可最大限度地降低意外组织损伤的风险，从而提高操作的精确性和可重复性。...

大鼠眼内注射技术：低不良反应风险

本研究介绍了一种将治疗剂递送至成年大鼠视网膜和视神经的方法。此外，还提出了一种独特的组织获取方法，可自上而下整体切取成年大鼠的视神经和视网膜。...

成人鼠眼部药物递送与先进组织获取

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建立眼病模型的玻璃体腔注射法

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