抑制大鼠神经元活动及其通过电生理学检测的方法

将一只已麻醉的大鼠固定在立体定位仪框架中，暴露其颅骨。

利用解剖学标志——前囟和后囟，定位上丘，这是一个负责处理视觉信息的深部脑结构。

钻孔以形成骨瓣，移除骨瓣，并应用缓冲液以保持暴露的脑组织湿润。

放置一个注射电极组件，该组件由连接到微型注射器的带电极微管组成。

微量移液器中含有抑制性神经递质溶液，可在电极同时记录神经元活动的同时抑制神经元兴奋性。

将注射电极插入上丘，并用熔化的琼脂覆盖暴露的表面，以防止脱水。

向眼睛呈现闪光以刺激神经元并诱发同步的动作电位。

注入神经递质，该递质会与其受体结合并触发氯离子内流。

这种内流使膜电位超极化，从而抑制动作电位的产生。

随着神经递质浓度随时间下降，神经元活动逐渐恢复。

为制备记录注射移液管，首先，拉制一根7厘米长、外径为1毫米的毛细管。使用Narishige垂直拉针仪720型或类似设备时，将加热器设定为18，电磁阀设定为1。接着，戴上手套，手动折断尖端以形成开口，并在显微镜下确认内径在30至40微米之间。使用目镜中的标尺进行测量。其阻抗相对较低，为0.3至0.6兆欧。

然后从非拉细的一端，将一根长约7厘米的银丝插入移液管中，并使1至2厘米的银丝留在移液管外。将这段多余的银丝相对于毛细管垂直弯折。接着，取一根30号皮下注射针头，在其针杆上涂覆柔性塑料粘合剂。然后缓慢地将针头尽可能深入地插入移液管中。

添加更多粘合剂，以在移液管和针头连接处形成密封。将移液管尖端朝上，让组件干燥约12小时。将大鼠麻醉并固定于立体定位仪后，涂抹眼用软膏，并彻底剃除其头部毛发。

在施加局部麻醉并确认麻醉手术方案后，使用10号手术刀片沿中线切开头皮。这将暴露冠状缝和矢状缝。然后，使用外科刮勺，确定人字缝和冠状缝这两个解剖学参考点。

调整头部位置，使这些解剖标志点处于同一水平面内。然后以眶耳线为基准，将玻璃管等精细刚性指针归零。接下来，根据相对于眶耳线的坐标，将玻璃管调整至目标位置。

使用记号笔在开颅目标区域周围画一个方框。现在，使用经过手术消毒的钻头，沿着标记缓慢去除骨质。开始时应尽量减少压力，并持续移动钻头，以避免因摩擦导致的热损伤组织。

当骨质变薄后，用镊子小心移除方形区域。无需去除硬脑膜，因为注射电极会穿透该层。此后，需持续用脑脊液冲洗暴露的皮质。首先用矿物油填充一支5至10微升的注射器，以准备注射电极。接着，将感兴趣的药物溶于生理盐水中，并加入染料。此处，将0.5%芝加哥天蓝色与300微摩尔GABA混合。

现在，先用1毫升注射器吸取已准备好的溶液，然后用该注射器将溶液注入注射毛细管中，以完成装填。当移除注射器时，需对活塞保持轻微压力，以防止因产生负压而将溶液从注射电极中抽出。检查可能的漏液点是否有液体渗出。用棉签吸去任何多余的液体，并重新检查是否漏液。

现在将装有矿物油的微量注射器连接到注射电极上，然后用纱布擦去多余的溶液。检查注射尖端，应能有微小液滴顺利流出；否则说明尖端堵塞或泄漏。接下来，将注射电极牢固地安装到微注射泵系统上。然后将注射电极移动至目标坐标位置，并将电极下降至视顶盖，该结构可通过记录视觉诱发电位来确认。

下放电极时，通过施加低流速的注射施加微小的正压，以防止堵塞。到达目标结构后，中断注射。插入注射电极后，用温热的琼脂覆盖暴露的皮层，以防止干燥。

电极最终放置到位后，等待30分钟，以使电极周围组织稳定。随后以每分钟40纳升的速度注射400至800纳升的溶液，直至上丘神经元活动失活。在注射抑制性溶液期间，电极应显示出放电尖峰的减少。