小鼠脊髓窗植入术用于活体成像

以一只麻醉小鼠开始，其脊髓已通过手术暴露。

将一块硼硅酸盐盖玻片置于脊髓上方，以创建用于成像的光学窗口。

将温热的琼脂糖涂抹在盖玻片边缘，利用毛细作用使其渗入盖玻片下方，以保持组织的湿润。

将组织粘合剂引入该部位周围完整的骨性结构，以稳定脊髓窗。

在粘合层上涂抹混合了加速剂的牙科水泥，然后在水泥固化前将3D打印的背板放置在盖玻片上。

涂抹额外的薄层水泥以增强背板的粘附性。

待水泥干燥后，将背板固定到叉形背板支架上，以尽量减少呼吸和心跳引起的运动伪影。

加入生理盐水以检查是否存在泄漏，必要时用额外的水泥进行密封。

最后，将小鼠和平台转移至双光子显微镜进行成像。

进行盖玻片植入时，将一片直径3毫米的硼硅酸盐盖玻片轻柔地置于暴露的脊髓上。使用小刮刀将已加热至39摄氏度的2%琼脂糖涂抹于盖玻片边缘，利用毛细作用使琼脂糖渗入盖玻片下方。在胸段第11和第13节椎骨棘突处完好的相邻椎骨暴露的骨性关节突上涂抹组织粘合剂。

在椎板切除部位周围、相邻肌腱及横突上，以环形方式涂抹额外的组织粘合剂。接着，用新的刮刀将混合了加速剂的牙科水泥涂于组织粘合剂层上，并将背板置于手术区域，使其中心对准盖玻片窗口。

涂抹多层薄层牙科水泥可增强背板的粘附强度，但务必在牙科水泥开始干燥前迅速放置背板。

在牙科水泥固化10分钟后，用额外的粘合剂填充基底内侧和背板的底面。

以薄层方式涂抹牙科水泥有助于降低水泥扩散至盖玻片和琼脂糖的风险，从而避免影响整个实验方案的进行。

当牙科水泥干燥后，将叉形背板固定器置于窗口上方的适当位置，并将背板拧入背板固定器中。然后向背板上滴加生理盐水以检测是否渗漏。随后可将动物和手术平台转移至双光子显微镜的光学平台，通过盖玻片窗口进行成像。