小鼠脑内靶向神经元基因编辑的立体定位病毒注射

将麻醉后的小鼠固定在立体定位仪中。

对剃净的头皮进行消毒，然后沿中线做一切口以暴露颅骨。

将颅骨干燥，并用过氧化氢处理以增强前囟点的可见性。

定位前囟和人字缝，然后确定目标位点。

在目标位置小心地钻穿颅骨。

将装有病毒的注射器连接到立体定位仪上。

该病毒编码Cas9和一种用于齿状回神经元基因组编辑的单导向RNA，同时携带一种荧光报告基因以标记被感染的神经元。

将注射器下放至齿状回，然后缓慢注射病毒，以确保分布均匀。

逐渐抬起注射器，并在其他坐标点重复注射。

暂停片刻以防止回流，然后缓慢拔出针头。

在对侧半球重复该操作。

最后，缝合切口。

该模型现已准备好进行进一步的研究。

剃除麻醉小鼠头部的毛发，以准备注射部位。将4%异氟烷导入鼻罩。接着，将小鼠置于立体定位仪中。将其门齿放入咬合杆的凹槽内，然后固定耳杆。

确保动物的身体位于加热垫上，鼻部置于鼻罩内。接着，通过捏压足部确认麻醉效果。然后，涂抹人工泪液以润滑眼睛。随后，用聚维酮碘和利多卡因擦拭已剃毛的头部。

现在，沿头皮正中线做一个小切口。用棉签将颅骨擦干，并涂抹过氧化氢以帮助观察前囟。使用解剖显微镜，在颅骨上定位前囟，并将钻头置于其上方。将数字立体定位仪的 x、y 和 z 三个方向坐标均设为 0。

为确保头部在前后（头尾）y轴上保持水平，将钻头置于人字缝（lambda），并调整头部位置，使前囟（bregma）和人字缝处的z坐标值大致等于0。为确保头部在x轴方向上保持水平，将钻头置于前囟与人字缝之间的中点位置，并测量中点两侧各1毫米处的z坐标值，确保二者相等。

接下来，在将钻头移至目标坐标前，将异氟烷浓度降至2%，然后小心地钻透颅骨。钻完所有孔后，将装有病毒的注射器固定在立体定位仪上。将注射器对准孔中心，并将颅骨表面的z坐标设为0。缓慢将注射器降至最深的z坐标位置，然后使用立体定位注射器以每分钟0.25 µL的速度开始注射。

在最深的 z 轴深度完成注射后，等待一分钟，再将注射针提升至下一个坐标位置并重新开始注射。重复此操作，直至完成所有 z 轴注射坐标的注射。最后一次注射完成后，等待两分钟，再移除注射器。随后将小鼠从立体定位仪中取出，并缝合头皮。在手术部位涂抹利多卡因和抗菌软膏，并给予镇痛药物，然后将动物转移至加热的恢复舱中。