向大鼠中枢神经系统鞘内递送测试化合物

0 次观看5:04 分钟 • June 17th, 2025

从一只已植入腰椎脊髓导管的麻醉大鼠开始。

将导管-导丝组件以一定角度经引导套管插入蛛网膜下腔,该腔隙内有脑脊液(CSF)循环。

移除导引套管,并缓慢将导管进一步插入。

然后,完全移除导丝,并将导管连接至输送系统。

将无菌生理盐水注入脊髓腔,确保通路通畅。

缓慢将测试化合物溶液注入脑脊液,随后用无菌生理盐水冲洗。

拆下输送系统,剪断导管,并热封其末端。

将热封的导管缝合至结缔组织,然后将皮肤覆盖在导管上并缝合关闭。清洁手术部位,让大鼠恢复。

测试化合物通过脑脊液扩散至脊髓和大脑,脊髓和大脑共同构成中枢神经系统或中枢神经系统(CNS)。

在中枢神经系统内,它可进入神经元并具有治疗潜力。

在放置导管和注射化合物时,首先确定剃毛后骨盆上方肌肉之间的两个自然凹陷。用一只手固定这两个凹陷,另一只手从尾侧向头侧方向轻压并触摸脊柱,以定位椎骨之间的第一个明显凹陷。确定S1与L6椎骨之间的椎间隙后,稍向头侧移动,以识别L5与L6椎骨之间的椎间隙。

使用手术刀在该部位沿中线从头侧向尾侧方向,在皮肤和肌膜上做长度不超过2厘米的切口,使注射部位位于切口中心。使用解剖剪分离结缔组织,直至可见肌层。在L6腰椎棘突外侧紧邻处的肌膜上做1厘米长的切口。

将导向套管针组件置于第六腰椎前侧附近,沿第六腰椎前侧推入椎间孔,使针尖进入椎管。

使用钝头镊子定位腰椎 L6 的背侧棘突。然后将针头沿第六椎骨的腹侧推进至椎间隙内。

沿着穿刺针将引导套管推至预定位置。取出穿刺针,将导管-导丝组件插入引导套管中。将导管与脊髓腔呈约45度角倾斜,用力将导管末端推进脊髓腔内约0.3厘米。

将导丝从导管的鞘内尖端退出约 2.5 厘米,然后将导管向前推进至椎管内,直至导管上的 2 厘米刻度线刚好位于肌肉下方可见。导管到位后,撤出引导套管,使导管和导丝保留在原位。

将导管推进至脊髓腔,直至导管上2厘米标记处到达椎管入口,随后完全撤出导丝。可观察到脑脊液流入已植入的导管中。然后通过30号针头端,将给药导管组件连接至已植入导管的远端。

接下来,将60微升无菌生理盐水加入一支100微升的注射器中,并将30微升待测化合物溶液注入第二支注射器。将装有生理盐水的注射器连接至给药导管组件的管路接头端,向鞘内腔注入20微升无菌生理盐水进行冲洗。

当所有生理盐水冲洗完毕后,将生理盐水注射器更换为预装有药液的注射器,并在30秒内向鞘内注射30 µL待测化合物。当全部药液注射完成后,再将装有药液的注射器更换为另一支装有生理盐水的注射器,用额外的40 µL生理盐水冲洗导管。

当第二份生理盐水输注完成后,将输注导管组件从植入式导管上分离,并使用一对高温灭菌的珠状镊子夹紧导管,以无菌方式切断并热封植入式导管。使用可吸收单丝缝线将热封后的导管固定于结缔组织,然后使用不可吸收缝线缝合皮肤。接着用纱布和生理盐水清洗皮肤上的血液,并将大鼠置于加热的孵育箱中持续监测,直至完全恢复卧位状态。