使用定位装置将siRNA递送至小鼠脑部的鼻内给药方法

将麻醉后的小鼠置于固定装置上，使其背部与椅背支撑面平行，并与座椅表面垂直。

将小鼠置于头低脚高且前倾的体位，并使用固定椅的安全带进行固定。

使用装有神经元靶向肽-siRNA 复合物的微量移液器，在小鼠一侧鼻孔附近滴加一滴溶液，使其自然吸入。

在小鼠吸气时轻轻将其头部向下按压，以防止溶液流入肺部。

暂停片刻，然后在另一侧鼻孔重复给药。

对剩余的小鼠重复该操作步骤。

该复合物穿透鼻黏膜，由此进入嗅觉神经和三叉神经，并经由这些神经传导至大脑。

在脑内，该复合物会结合神经元受体，经内吞作用进入细胞，并促进细胞内siRNA的递送。

siRNA 会成为 RISC 复合物的一部分，该复合物在与靶标 mRNA 结合后，可诱导基因沉默。

开始此操作前，通过评估小鼠的双足反射来判断其麻醉水平，以维持手术所需的麻醉状态。接着，将定位装置放置在适当的距离和高度，以便方便地接触所有必需的试剂。

然后将药膏涂抹在动物的眼睛上。使用固定带将一只小鼠固定在座椅上，确保小鼠的前肢在放松且无不适的状态下能自然支撑身体。对剩余的小鼠重复上述操作。将每只小鼠轻轻放置在指定的座椅上，使其背部与椅背平行，并与座椅呈90度角。

让动物自然处于头低向前的位置，不要推压。所有小鼠固定后，立即开始鼻内接种。进行鼻内给药时，用微量移液器吸取2 µL RVG9R-siRNA复合物溶液。用惯用手持移液器，并用另一只手加以支撑，以避免给予siRNA时发生不受控制的移动。

将约 2 微升的液滴放置在靠近小鼠一侧鼻孔的位置，使其能够直接吸入。如果难以形成微小液滴，请更换新的移液器吸头并重复操作。当小鼠吸气时，用食指轻轻下压其头部并保持 5 秒钟，维持该姿势。

为防止药物流入肺部，在小鼠吸气时，用食指轻轻将小鼠头部向下压住5秒钟非常重要。

启动秒表，从此时开始计时三到四分钟，以确定第一只小鼠另一侧鼻孔接种的时间。此时间间隔对于小鼠完成首次剂量的吸入并恢复正常的呼吸至关重要。在对第一只小鼠交替鼻孔接种之间的三到四分钟间隔内，完成装置上其余三只小鼠每只单侧鼻孔的鼻内接种。

当秒表响起时，对第一只小鼠的另一侧鼻孔进行接种，并按上述步骤依次对其他小鼠进行操作。重复该操作，直至所有四只小鼠均接种 20 至 30 微升（µL）的接种物。整个接种过程大约需要 30 至 45 分钟完成。将动物放回指定的笼具中。在小鼠恢复足够的意识、能够维持胸卧位之前，不得使其无人看管。