Name: 老鼠的眼睛剜除术的远程高通量的表型 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 30 s
Description: 学习小鼠眼球剜除术的标准操作流程，掌握眼眶解剖标志与组织固定技术。本视频演示高通量表型筛选中的关键手术步骤，帮助研究人员精准获取完整眼球标本用于神经科学研究。

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预防失明研究基金会；加州大学洛杉矶分校朱尔斯·斯坦因眼科研究所所长 Bartly J. Mondino 医学博士；以及桑格研究所惠康基金会基因组园区的 Ramiro Ramirez-Solis、Jacqui White 和 Jeanne Estabel。本研究符合 ARVO 关于在眼科与视觉研究中使用动物的声明。

1. 钝性解剖：小鼠眼球在未固定标本中的摘除
<ol>
 <li>拉开眼睑，以更好地暴露并接触到眼球后部表面。</li>
 <li>将一把弯头敷料钳置于眼眶（眼窝）内眼球的后方（下方）。Mahajan Sharptip 敷料钳是一种定制器械，其尖端较细，可使此步骤更简便（参见材料与试剂表）。</li>
 <li>闭合敷料钳，夹住眼球后方的眶内结缔组织和视神经，注意避免挤压眼球本身。</li>
 <li>轻柔向上牵拉敷料钳，将眼球从眼眶中摘出。白色线状组织即为视神经。</li>
 <li>将眼球放入 PBS 中。使用 30 号针头，在角膜缘后方立即刺入眼球 1–2 mm，形成单个穿刺孔。此操作可使原本难以穿透眼组织的固定剂（如戊二醛）直接进入眼内。若使用能够扩散进入目标眼组织的固定剂（如多聚甲醛或乙醇），则可能无需制作此穿刺孔。</li>
 <li>立即将整个眼球浸入固定剂中进行浸没固定。</li>
</ol>
2. 锐性解剖：灌注固定后小鼠眼球的摘除
<ol>
 <li>使用弯头蜂鸟镊将眼睑与眼球分离。</li>
 <li>将弯曲的威斯科特解剖剪与眼球平行放置，方向朝向眼眶后部。</li>
 <li>从下方、内侧、上方和外侧切断环绕眼球的固定结缔组织。</li>
 <li>将弯曲镊子置于眼球后方，夹住结缔组织但避免压迫眼球，向前牵拉以摘除眼球。由于灌注固定使眼眶结缔组织变硬，可能需要进一步剪切眼眶组织，才能完全松解眼球。</li>
</ol>
3. 固定与包装
固定组织的运输必须遵守您所在机构及邮政服务的相关要求，包括适当的标签和包装。以下方案是运输非感染性生物样本（室温条件下）的一个示例。该运输方式需要三层包装，但无需粘贴A类/B类生物物质或液氮标签。
<ol>
 <li>将眼球放入一个5 mL的玻璃闪烁瓶中，加入至少3 mL固定液；若固定时间较短，则使用后固定缓冲液。在瓶盖上写明追踪编号，并用Parafilm密封。</li>
 <li>将闪烁瓶放入经生物样本运输认证的运输容器中。例如，在我们研究所，认证容器需具备三层结构：最内层为密封容器，用于放置样本；中间层为吸水材料；外层为保护性外壳。</li>
 <li>将该容器用气泡膜包裹后，放入经认证的实验室运输箱中，并附上相应的文件资料。</li>
</ol>
4. 代表性结果
眼睛的组织学检查可通过多种方法进行，包括苏木精和伊红染色、酶表达检测、透射电子显微镜观察以及免疫组织化学。组织经4%多聚甲醛浸没固定后，包埋于石蜡中，并使用切片机进行切片。在高通量表型分析中，我们分析包含眼球内所有组织类型的瞳孔-视神经切面（图1）。此外，还对组织切片进行了lacZ表达检测（图2）、细胞器的透射电子显微镜观察（图3），以及利用抗体检测特定分子的表达（图4）。
在我们的表型筛选方法中，无需保持眼睛相对于鼻侧（内眦）和颞侧（外眦）的方向。如果需要确定眼睛的方向，至少有两种选择。摘除眼球后，我们曾使用手持电灼装置在角膜颞侧三点钟位置进行轻微电灼处理。该灼伤在组织学上清晰可见，且在后续处理过程中不会像组织学染料那样丢失。缺点是电灼会损伤角膜，而角膜可能是检查所需的关键组织。另一种方法则需要具备识别眼外肌止点能力的熟练解剖学者。在体视显微镜下，通过识别下斜肌和上斜肌的止点，可标记出眼球的下部和上部方位。3 无论采用哪种定向方法，都必须记录标本为右眼或左眼。结合这些信息，可在切片前实现眼球方位的精确定位。
<img src="/files/ftp_upload/3184/3184fig1.jpg" alt="眼球解剖显微图像；组织学切片；晶状体、视网膜、角膜；细胞层细节。" data-altupdatedat="1754907495000" data-alt="图1"> 
图1. 远程采集后的小鼠眼球组织学图像。 小鼠眼球经4%多聚甲醛灌注固定后，通过锐性解剖摘除。A. 瞳孔-视神经切面经苏木精和伊红染色，显示所有组织亚结构均得到良好保存。ON，视神经。（绿色标尺 = 500 微米）B. 正常视网膜的高倍放大图像显示其层状结构：RGC，视网膜神经节细胞；IPL，内丛状层；INL，内核层；OPL，外丛状层；ONL，外核层（光感受器细胞）（箭头）；IS，光感受器内节（箭头）；OS，光感受器外节；RPE，视网膜色素上皮；C，脉络膜。（绿色标尺 = 50 微米）C. 与正常视网膜相比，该样本因光感受器变性而变薄。ONL、IS 和 OS 完全缺失（箭头）。（绿色标尺 = 50 微米）
<img src="/files/ftp_upload/3184/3184fig2.jpg" alt="睫状体上皮组织学；显微图像比较上皮层与基质层；细胞细节。" data-altupdatedat="1754907495000" data-alt="图2"> 
图2. 转基因小鼠中的lacZ表达。 通过钝性解剖摘除眼球，并在1 mg/ml X-gal溶液（5 mM K3Fe(CN)6、5 mM K4Fe(CN)6、2 mM MgCl2、0.02% NP40和0.1%脱氧胆酸钠）中37°C孵育过夜。眼球用2%甲醛/0.2%戊二醛固定30分钟，随后用切片机切片。X-gal反应产物（蓝色）标记：A. 睫状体上皮，B. 角膜上皮，以及C. 视网膜中的视网膜神经节细胞（RGC）层。INL，内核层；ONL，外核层。
<img src="/files/ftp_upload/3184/3184fig3.jpg" alt="视网膜结构；透射电镜显示视杆细胞外节、视网膜色素上皮细胞和布鲁赫膜。" data-altupdatedat="1754907495000" data-alt="图3"> 
图3. 视网膜色素上皮（RPE）的透射电子显微镜观察。 经钝性分离并制造穿刺伤口后，眼球组织在含2.5%多聚甲醛和2.5%戊二醛的0.1 M磷酸钠缓冲液中浸没固定。随后用1%四氧化锇进行二次固定，逐步脱水后包埋于Spurr树脂中。组织切片厚度为90 nm，置于覆盖有Formvar膜的铜载网上，使用透射电子显微镜成像。电镜图像显示了神经感觉视网膜的光感受器外节、视网膜色素上皮细胞内的黑色素体（M）以及布鲁赫膜。
<img src="/files/ftp_upload/3184/3184fig4.jpg" alt="细菌生物膜结构的荧光显微镜图像；放大尺度为20微米。" data-altupdatedat="1754907495000" data-alt="图4"> 
图4. 小鼠玻璃体中超氧化物歧化酶-3（绿色）的免疫组织化学标记。 通过钝性解剖摘除眼球，并在4%多聚甲醛中进行浸没固定。样品包埋于石蜡中，使用切片机进行切片。组织切片与兔多克隆SOD3抗血清（1:50稀释）孵育。采用 goat anti-rabbit IgG (H+L)-Alexa Fluor 488 标记的二抗检测SOD3表达。SOD3的标记显示为绿色。

<ol><li>Song, B. J., Tsang, S. H., Lin, C. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+models+of+retinal+degeneration+and+targets+for+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Genetic models of retinal degeneration and targets for gene therapy.</a> Gene Ther. Mol. Biol. 11, 229-262 (2007).</li>
<li>Mahajan, V. B., Mondino, B. J., Tsang, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+Mouse+Eye+Phenomics+System%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Laboratories%2C+Mouse+Genetics+Meeting%22%5BJournal%5D)">A high-throughput Mouse Eye Phenomics System.</a> Cold Spring Harbor Laboratories, Mouse Genetics Meeting. , (2010).</li>
<li>Smith, R. S., John, S. W. M., Nishina, P. M., Sundberg, J. P. In Research Methods For Mutant Mice. , CRC Press. Boca Raton, FL. (2002).</li>
<li>Chang, B., Hawes, N. L., Hurd, R. E., Davisson, M. T., Nusinowitz, S., Heckenlively, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+degeneration+mutants+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Res%22%5BJournal%5D)">Retinal degeneration mutants in the mouse.</a> Vision Res. 42, 517-525 (2002).</li>
<li>Anderson, M. G., Smith, R. S., Hawes, N. L., Zabaleta, A., Chang, B., Wiggs, J. L., John, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+in+genes+encoding+melanosomal+proteins+cause+pigmentary+glaucoma+in+DBA%2F2J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Genet%22%5BJournal%5D)">Mutations in genes encoding melanosomal proteins cause pigmentary glaucoma in DBA/2J mice.</a> Nat. Genet. 30, 81-85 (2002).</li>
<li>Hawes, N. L., Smith, R. S., Chang, B., Davisson, M., Heckenlively, J. R., John, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+fundus+photography+and+angiography%3A+a+catalogue+of+normal+and+mutant+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Vis%22%5BJournal%5D)">Mouse fundus photography and angiography: a catalogue of normal and mutant phenotypes.</a> Mol. Vis. 5, 22-22 (1999).</li>
<li>Won, J., Shi, L. Y., Hicks, W., Wang, J., Hurd, R., Naggert, J. K., Chang, B., Nishina, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+resources+for+vision+research%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Mouse model resources for vision research.</a> J. Ophthalmol. 2011, 391384-391384 (2011).</li>
<li>Pinto, L. H., Vitaterna, M. H., Siepka, S. M., Shimomura, K., Lumayag, S., Baker, M., Fenner, D., Mullins, R. F., Sheffield, V. C., Stone, E. M., Heffron, E., Takahashi, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Results+from+screening+over+9000+mutation-bearing+mice+for+defects+in+the+electroretinogram+and+appearance+of+the+fundus%5BTitle%5D)+AND+%22Vision.+Res%22%5BJournal%5D)">Results from screening over 9000 mutation-bearing mice for defects in the electroretinogram and appearance of the fundus.</a> Vision. Res. 44, 3335-3345 (2004).</li>
<li>Heckenlively, J. R., Winston, J. V., Roderick, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+for+mouse+retinal+degenerations.+I.+Correlation+of+indirect+ophthalmoscopy%2C+electroretinograms%2C+and+histology%5BTitle%5D)+AND+%22Doc.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Screening for mouse retinal degenerations. I. Correlation of indirect ophthalmoscopy, electroretinograms, and histology.</a> Doc. Ophthalmol. 71, 229-239 (1989).</li>
<li>Tsang, S. H., Gouras, P., Yamashita, C. K., Kjeldbye, H., Fisher, J., Farber, D. B., Goff, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+degeneration+in+mice+lacking+the+gamma+subunit+of+the+rod+cGMP+phosphodiesterase%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Retinal degeneration in mice lacking the gamma subunit of the rod cGMP phosphodiesterase.</a> Science. 272, 1026-1029 (1996).</li>
<li>Tsang, S. H., Woodruff, M. L., Jun, L., Mahajan, V., Yamashita, C. K., Pedersen, R., Lin, C. S., Goff, S. P., Rosenberg, T., Larsen, M., Farber, D. B., Nusinowitz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+mice+carrying+the+H258N+mutation+in+the+gene+encoding+the+beta-subunit+of+phosphodiesterase-6+%28PDE6B%29+provide+a+model+for+human+congenital+stationary+night+blindness%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mutat%22%5BJournal%5D)">Transgenic mice carrying the H258N mutation in the gene encoding the beta-subunit of phosphodiesterase-6 (PDE6B) provide a model for human congenital stationary night blindness.</a> Hum. Mutat. 28, 243-254 (2007).</li>
</ol>

未声明任何利益冲突。

大多数转基因小鼠存在于并不研究眼睛的实验室中。我们的视频技术展示了一种简单、标准化的方法，用于远程传递手术技能，以优化从缺乏眼部研究经验的实验室获取组织样本的过程。该视频技术有助于克服高通量表型分析中的一个主要缺陷，即由于组织采集和固定方法缺乏标准化，导致只能依赖少数专家中心，从而阻碍了有意义的比较性表型和分子研究。为了在任何新的远程实验室及技术人员中建立并维持质量控制，重要的是在研究开始时以及研究过程中定期纳入野生型眼睛样本。我们还发现，当从多种基因型转移多个眼睛样本时，追踪系统至关重要，例如采用基于网络的系统为每只眼睛分配唯一的识别编号。尽管灌注固定的动物能获得更高质量的固定效果及后续组织切片，但我们发现，从未固定动物摘除的眼球样本对于大多数形态学和分子研究已足够适用。此外，在来自不同来源的高通量研究中，获取未固定动物的眼睛样本可能显著更易于处理。转基因小鼠是研究人类眼病的重要工具10, 11，而通过远程组织获取实现本地化表型分析，可最大限度地利用这一宝贵资源。类似策略在组织解剖与共享中的应用，可能对非眼科组织的高通量表型分析产生重要影响。

<table><tbody><tr><td>弯型敷料镊</td><td>Storz Ophthalmics</td><td>E1408</td><td></td></tr><tr><td>Mahajan 尖头敷料镊</td><td>Storz Ophthalmics</td><td>E1406 (货号 SP7-64520)</td><td></td></tr><tr><td>弯型 Westcott 剪刀</td><td>Storz Ophthalmics</td><td>E3321 WH</td><td></td></tr><tr><td>15&amp;#x00B0; BD Beaver 显微手术刀片</td><td>BD Biosciences</td><td>374881</td><td></td></tr><tr><td>0.22 细型 Castroviejo 缝合镊</td><td>Storz Ophthalmics</td><td>E1805</td><td></td></tr><tr><td>0.12 Colibri 镊</td><td>Storz Ophthalmics</td><td>2/132</td><td></td></tr><tr><td>30 号针头</td><td>BD Biosciences</td><td>305128</td><td></td></tr><tr><td>生物危害品邮寄容器</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-523-4</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm 封口膜</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-374-10</td><td></td></tr><tr><td>玻璃闪烁瓶</td><td>Wheaton</td><td>4500413033</td><td></td></tr><tr><td>PBS，pH 7.4</td><td>Invitrogen</td><td>70011-044</td><td></td></tr><tr><td>16% 多聚甲醛</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15700</td><td></td></tr><tr><td>2.5% 多聚甲醛 / 2.5% 戊二醛溶于 0.1 M 磷酸钠缓冲液</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15700 &amp;amp; 16300</td><td>实验室配制</td></tr><tr><td>50% 戊二醛</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>16300</td><td></td></tr><tr><td>0.25% Formvar 溶液</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15810</td><td></td></tr><tr><td>铜网载网（Slot Grid）</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>M2010-CR</td><td></td></tr><tr><td>4% 四氧化锇</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>19140</td><td></td></tr><tr><td>抗 SOD3 抗体</td><td>Abcam</td><td>Ab21974</td><td></td></tr><tr><td>山羊抗兔 Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>A11070</td><td></td></tr><tr><td>Spurr&amp;rsquo;s 包埋树脂</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>14300</td><td></td></tr></tbody></table>

用于远程高通量表型分析的小鼠眼球摘除术

Mouse Eye Enucleation for Remote High-throughput Phenotyping

小鼠眼睛是研究人类眼病转化医学的重要遗传学模型。人类致盲性疾病，如黄斑变性、感光细胞退化、白内障、青光眼、视网膜母细胞瘤和糖尿病视网膜病变，已在转基因小鼠中成功模拟。1-5 大多数转基因和基因敲除小鼠最初由实验室为研究非眼科疾病而构建，但由于不同器官系统间存在基因保守性，许多相同基因也可能在眼部发育和疾病中发挥作用。因此，这些小鼠为发现新的眼表型与基因型相关性提供了重要资源。由于这些小鼠分布于全球各地，高效且经济地获取、维持并进行表型分析存在困难。因此，大多数高通量眼科表型筛选仅限于少数具备现场眼科专业技术的机构，以对活体小鼠的眼睛进行检查。6-9 我们实验室开发了一种替代方法，即远程组织获取技术，可用于大规模或小规模的转基因小鼠眼组织调查。通过标准化的视频化手术技能传递、组织固定和运输流程，任何实验室均可从突变动物中采集完整眼球，并送至专业机构进行分子和形态学表型分析。在本视频文章中，我们展示了摘除并转运未经固定及灌注固定的鼠眼以进行远程表型分析的技术方法。

该解剖技术展示了为进行高通量筛选中的表型分析而对小鼠眼球进行摘除以固定组织的方法。

小鼠眼睛是研究人类眼病转化医学的重要遗传学模型。人类的致盲性疾病，如黄斑变性……

本视频将演示小鼠的眼部结构以及摘除眼球的操作，即从眼窝中取出眼球。眼球的下界为下眼睑边缘。此处为内侧或鼻侧睑角。后方为颞侧或外眦。上方为上睑缘。这是一个手术标本。针头指向透明的角膜。我们可以看到晶状体略微突出于虹膜之外。虹膜位于此处，呈棕色，覆盖在晶状体上。最重要的手术标志是这条白色线条，即角膜缘，穿刺切口将位于其后方。眼球的后半部分位于角膜缘后方，我们所指的是眼外肌的附着点。你可以看到此处肌肉紧贴眼球表面，以及填充眼眶的结缔组织，其中包括睑板腺（Arian gland）。最后，这是通过钝性解剖获得的白色条状视神经。使用带有尖端的定制弯头敷料镊，首先将眼睑分开。这通常会使眼球向外突出。用镊子小心地伸入眼眶并到达眼球后方，轻柔地在眼球后方挤压，但不要挤压眼球本身，并向前牵拉。此时应已夹住结缔组织而非眼球。若将眼球侧向翻转，便可看到伴随白色视神经的眶内组织。这是第二次解剖，旨在再次展示操作过程：从眼角进入，将镊子推至眼球后方，夹住结缔组织，并向前牵拉，注意不要压迫眼球本身。再次可以看到，结缔组织位于白色视神经的长条状结构中。要制造穿刺伤口时，应通过一条眼外肌的附着点夹住眼球，并在角膜缘后方、靠近手持眼球的位置插入针头，以稳定眼球。这将使固定剂进入眼球。如果穿刺位置距离你握持眼球的位置过远，眼球会非常不稳定，且难以在不压迫眼球或施加过度压力的情况下完成切口。你也可以抓住眼球后方的全部结缔组织。某些固定剂不需要穿刺伤口。通常，我们将眼球置于一个5 cc的闪烁瓶中，加入至少3 cc的固定剂，以确保眼球完全浸没。对于灌注固定的动物，需要进行锐性解剖。我们使用弯头卡利伯力镊和弯头韦斯科特剪刀。用卡利伯力镊夹住下眼睑。将剪刀紧贴眶骨插入，开始剪断结缔组织。我们使用镊子远离眼球弯曲，并避免在操作中夹取组织。从一侧睑缘切迹到另一侧，下眼睑边缘的任何部位均可进行操作。当到达某一位置时，大部分结缔组织已被去除，此时可将剪刀滑入眼球后方，将眼球向外牵拉。再看另一个示例，将剪刀插入眼眶，但这次是紧贴眶骨而非眼球，剪断周围的结缔组织。这将逐步松解眼球，眼球就像篮筐中的篮球。用镊子拉开眼睑，围绕眼球进行轻柔的短切口。这里我们用Collibra钳夹住结缔组织或肌肉附着点，将眼球从眼眶结缔组织上完全剪下。眼球经适当固定后，若需运输，我们在样品管周围包裹一些Parafilm封口膜。包装必须符合您所在大学及政府的相关规定。我们通常将样本放入带有少量棉花的容器中，以吸收可能渗出的液体，该容器必须严格密封。随后，将此运输容器放入气泡塑料袋中。将其放入液体实验室运输包装中，并附上所有相关文件。

mouse-eye-enucleation-for-remote-high-throughput-phenotyping

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老鼠的眼睛剜除术的远程高通量的表型

本实验方案介绍了一种简单且经济的方法，通过离体电穿孔技术在活体小鼠视网膜中定量分析顺式调控元件（即增强子/启动子）的活性。文中详细描述了DNA制备、视网膜分离、电穿孔、视网膜离体培养以及固定后的分析与定量过程。...

量化活性 顺式-利用外植体电穿孔技术研究小鼠视网膜中的调控元件

来源： Jagodzinska, J., et. al.，活体小鼠视网膜神经节细胞的光学相干断层扫描成像。 J. Vis. Exp. (2017)...

使用光学相干断层扫描技术对小鼠视网膜进行活体成像

摘除眼球，也称为去眼球术（enucleation），是一种研究哺乳动物视觉系统中视觉、跨模态及发育可塑性的重要策略，因为它可诱导不可逆的部分（单眼）或完全（双眼）视力丧失。本文介绍了一种高度可重复且简便的方法，用于实施活体（in...

一种高度可重复且简便的实验操作方法 体内 小鼠睁眼后的摘眼球术

本文介绍了使用R26R-Confetti小鼠进行多色谱系示踪实验的设计与操作原理，并提供了一种针对角膜上皮细胞追踪的具体实验方案，该方案可经修改后适用于其他感兴趣的组织。...

使用多色荧光报告小鼠对角膜细胞进行谱系示踪的方法

本文展示了一种利用高分辨率谱域光学相干断层扫描（HR-SD-OCT）将基因治疗药物递送至视网膜下腔、评估其分布范围并表征光感受器活性的新方法。...

超高分辨率小鼠光学相干断层扫描技术在视网膜基因治疗研究中辅助眼内注射

本文展示了一种用于活体小鼠眼表成像的多光子显微成像平台。利用荧光转基因小鼠，可实现对眼表内的细胞核、细胞膜、神经纤维及毛细血管的可视化观察。来源于胶原结构的非线性二次谐波生成信号，可实现对基质结构的无标记成像。...

一种用于小鼠角膜和结膜活体成像的定制多光子显微镜平台

活体成像是研究健康与疾病状态下生物学的有力工具。本方案描述了使用标准双光子显微镜对小鼠视网膜进行经瞳孔成像的方法。同时展示了多种活体成像技术，用于对视网膜中多个细胞群体进行荧光标记。...

经瞳孔双光子活体小鼠视网膜成像

本方案最初由 Fernandez-Godino 等人于 2016 年报道1，描述了一种高效分离和培养小鼠 RPE 细胞的方法，这些细胞在 Transwell 培养板上一周内即可形成具有功能性和极性的 RPE 单层。该操作过程约需 3...

高效分离与原代培养小鼠视网膜色素上皮细胞

本文介绍了一种用于啮齿类动物的眼部显微解剖方案。该过程包括摘除眼球及其瞬膜（即第三眼睑），随后分离眼球的后部和前部眼杯。...

啮齿类动物眼球的显微解剖

视网膜在其层状结构中表现出复杂的空间组织。现代空间转录组学和测序技术需要厚度小于&lt; 20 µm的组织切片，这限制了其在视网膜研究中的应用。本新鲜冷冻冷冻切片方法可在保持视网膜平面空间关系的同时，制备小鼠视网膜的薄层en...

En face 小鼠视网膜冷冻切片用于高维空间分子分析

本文展示了一种利用转盘共聚焦显微镜对视网膜中小胶质细胞的运动性及其与突触后斑点接触进行可视化和定量分析的方法。...

活体成像与特征分析疾病小鼠视网膜中小胶质细胞动态及其与突触的相互作用

学习小鼠眼球剜除术的标准操作流程，掌握眼眶解剖标志与组织固定技术。本视频演示高通量表型筛选中的关键手术步骤，帮助研究人员精准获取完整眼球标本用于神经科学研究。

用于远程高通量表型分析的小鼠眼球摘除术

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