重组髓鞘少突胶质细胞糖蛋白的分离与纯化

MOGtag 是一种重组髓鞘少突胶质细胞糖蛋白，融合了可溶化和纯化标签，用于实验性自身免疫性脑脊髓炎研究。

为了分离MOGtag，将表达MOGtag的细菌细胞悬浮于裂解缓冲液中并进行孵育。

缓冲液中的酶和去污剂可破坏膜脂质并降解细胞壁。

超声处理以进一步裂解细胞，释放含有MOGtag的不溶性包涵体。

离心以沉淀包涵体。弃去上清液，将沉淀物重悬于缓冲液中，并进行孵育。

加入盐酸胍，然后孵育以溶解 MOGtag。

将可溶性蛋白质转移至带电荷的镍树脂上，混匀后振荡孵育，使MOGtag与镍离子结合。

离心以沉淀结合的MOGtag。弃去上清液，将沉淀重悬于洗脱缓冲液中，并在振荡条件下孵育。

洗脱缓冲液中的咪唑可将MOGtag从树脂上释放下来。

再次离心，收集含有纯化MOGtag的上清液，并储存以备后续分析。

将菌液均匀分配至若干个适用于高速离心的250毫升离心瓶中，此后所有操作均需将离心瓶置于冰上。在4摄氏度条件下，以22,000 ×g离心15分钟，收集细菌细胞沉淀。用总共30毫升裂解缓冲液重悬并合并所有细菌沉淀。将此悬液转移至可进行高速离心的50毫升圆底离心管中。

将该离心管置于30摄氏度水浴中孵育30分钟。孵育期间，振荡混匀管内液体两次，以重新悬浮细胞。孵育结束后，将离心管转移至冰上，对溶液进行超声处理，条件为20千赫兹、振幅70%，每次超声3秒，间歇3秒，共5次脉冲。重复此五次脉冲过程共六轮，每轮之间将溶液置于冰上冷却。

接下来，在 4 摄氏度下以 24,000 ×g 离心溶液 15 分钟，然后将沉淀重悬于 30 毫升缓冲液 A 中，并在 4 摄氏度下孵育 3 小时。随后，向溶液中加入 17.2 克盐酸胍。将样品置于冰上孵育 1 小时，以溶解 MOG 标签蛋白。为纯化 MOG 标签蛋白，将全部溶解后的蛋白溶液转移至含有镍树脂的第一支试管中。混匀后，将试管水平放置于 4 摄氏度的摇床上 1 小时。

在4摄氏度下以4,500 × g离心8分钟后，将上清液转移至第二个装有镍树脂的离心管中，并按之前方法孵育。同时，将第一个离心管中的镍树脂用40毫升洗脱缓冲液重悬，将离心管水平置于摇床上，在4摄氏度下孵育5分钟，然后按前述条件离心。将含有洗脱的MOG标签蛋白的上清液转移至一个标记为“纯化的MOG标签蛋白”的250毫升瓶中，并将该瓶置于4摄氏度保存。