向大鼠脊髓注射病毒载体以进行逆行神经元示踪

使用含有高效逆向转运（HiRet）病毒载体的显微注射器和微针。

HiRet 病毒包膜中的糖蛋白可通过突触促进其进入神经元。该病毒还携带一个编码荧光蛋白的基因。

取一只麻醉后暴露腰段脊髓1至4节的实验大鼠。

以脊髓的中线为参考，将针头置于注射部位上方。

将针头插入脊髓。

以可控速率开始给予病毒。

在拔出针头前，应留出足够时间让病毒扩散。

神经元受体与病毒糖蛋白结合，促进病毒通过突触进入，并沿轴突运输至胞体，这一过程称为逆向轴突运输。

病毒基因与宿主基因组整合，从而实现荧光蛋白的表达。

这些病毒还能通过相互连接的神经元传播，从而实现对神经通路的示踪。

将针头置于脊髓正中线，使用显微操作仪上的游标尺将针头向侧方移动 0.8 毫米。然后将针头缓慢下降至脊髓表面，使其压迫但不穿透硬脊膜。接着以快速扭转动作刺穿硬脊膜，直至针尖进入深度达 1.5 毫米。

针头到位后，设置注射仪以每分钟400纳升的速度递送病毒，并通过观察染料前沿的推进情况确认病毒已进入脊髓。注射完成后，让针头在脊髓内停留2至5分钟，以促进病毒扩散，然后缓慢撤出针头，准备在下一个注射位点进行定位。