$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
从麻醉的受体小鼠幼崽开始。用胶带固定其头部,确保头骨保持暴露。
使用解剖参考 lambda 定位目标大脑区域。
将
微量移液器放置在目标区域上,装有能够分化为成熟中间神经元的中间神经元前体细胞的悬浮液。
这些前体细胞来源于与受体处于同一发育阶段的供体幼崽的皮层、纹状体或海马体。
将
悬浮液注射到大脑中以进行同位移植,其中前体被输送到其起源区域,或异位移植,其中它们被引入不同的大脑区域。
在
缩回微量移液器之前让悬浮液扩散以防止回流。
将幼犬转移到加热垫上进行恢复。
现在可以评估受体幼崽大脑中供体前体的存活和成熟。
将
矿物油装入细头微量移液器。将微量移液器连接到纳升注射器上,并将纳升注射装置固定到连接到磁性底座的机械手上。当第一只幼崽在冰上麻醉时,移液细胞溶液数次以确保细胞分布均匀。
弹
出矿物油,用单细胞悬浮液完全填充移液器。确认对脚趾捏没有反应后,将幼犬放在培养皿盖上,头部靠在粘性腻子上,使头顶相对平坦。
用一块带有金刚石孔的实验室胶带盖住头部,拉紧胶带直到皮肤被拉伸,使头部牢固固定,并且通过孔可以看到 lambda。将固定的小狗移动到纳升注射器下方并降低微量移液器,使吸头位于 lambda 的正上方。
观察机械手上的 x、y 坐标并调整机械手旋钮,直到微量移液器沿头部的中外侧和前后轴定位在适当的坐标处。降低微量移液器,直到尖端在皮肤上形成一个小凹陷,然后用力但轻轻地转动 z 轴机械手旋钮,将微量移液器穿过皮肤和头骨进入大脑。
稍微
缩回微量移液器,直到吸头被形状像帐篷的锥形皮肤包围,然后沿 z 轴查看坐标。然后将微量移液器降低到适当的实验深度并注射细胞。细胞输送后等待 15 秒,然后再缩回微量移液器,如果需要,在第二个位置重复注射。将幼犬放在加热垫上并进行监测,直到完全恢复,然后再转移回家庭笼子。