0 次观看 • 3:26 分钟 • June 17th, 2025
从一只已麻醉的受体幼鼠开始。用胶带固定其头部,确保颅骨暴露。
使用解剖学参考标志点 lambda 来定位目标脑区。
将微量移液器置于目标区域上方,移液器中装有能够分化为成熟中间神经元的中间神经元前体细胞悬液。
这些前体细胞来源于与受体处于相同发育阶段的供体幼鼠的皮层、纹状体或海马区。
将悬浮液注射到大脑中,以进行同源性移植(将前体细胞输送至其起源区域)或异源性移植(将前体细胞引入不同的脑区)。
在撤回微量移液管之前,让悬液充分扩散,以防止回流。
将幼崽转移至加热垫上以恢复。
现在可以评估供体前体细胞在受体幼鼠脑内的存活与成熟情况。
用矿物油填充细尖微量移液器。将微量移液器连接至纳升注射仪,并将纳升注射装置固定在连接于磁性底座的操纵器上。在第一只幼鼠于冰上麻醉的同时,反复吹打细胞悬液数次,以确保细胞分布均匀。
推出矿物油,并用单细胞悬液完全充满移液管。确认幼鼠对脚趾夹捏无反应后,将其置于培养皿盖上,头部置于黏性橡皮泥上,使头顶部相对平坦。
用带有菱形孔的实验室胶带覆盖头部,将胶带拉紧,直至皮肤伸展,使头部牢固固定,并能通过孔洞清晰看到人字缝。将固定好的幼鼠移至纳升注射仪下,降低微移液管,使其尖端正对人字缝上方。
观察操作仪上的 x、y 坐标,调节操作仪旋钮,直至微电极位于头部正中-外侧轴和前-后轴的适当坐标位置。降低微电极,使其尖端在皮肤表面形成微小凹陷,然后牢固而轻柔地转动 z 轴操作仪旋钮,将微电极穿过皮肤和颅骨插入脑组织。
将微量移液器略微上提,直至其尖端被呈帐篷状的皮肤锥体包围,同时观察 z 轴方向的坐标。然后将微量移液器降至适当的实验深度并注入细胞。细胞注入后等待 15 秒,再回撤微量移液器;如需,可在第二个位置重复注射。将幼鼠置于加热垫上,监测直至其完全恢复,然后转移回原笼中。