电穿孔介导的小鼠背根神经节转染以促进感觉轴突再生

取一只麻醉小鼠，暴露其含有感觉神经元胞体的L4和L5背根神经节。

使用带有荧光标记的RNA构建体和示踪染料填充显微注射移液管，这些RNA构建体可调控轴突再生。

将混合物注射到背根神经节（DRGs）中。

使用电穿孔电极，对背根神经节（DRGs）施加电脉冲。

这会破坏感觉神经元胞体的细胞膜，形成允许载体进入细胞质的孔道，从而促进转染。

缝合切口并让小鼠恢复。

几天后，重新麻醉并固定小鼠。

在左侧中线外侧做一切口。解剖肌肉以暴露坐骨神经。

压碎神经以损伤感觉神经元轴突。用缝合结标记损伤部位。

缝合切口并让小鼠恢复。

转染的构建体靶向背根神经节感觉神经元胞体中的mRNA， transiently 调控蛋白质生成，以促进损伤后感觉轴突的再生。

进行DRG注射时，将DNA质粒或RNA寡核苷酸装入玻璃毛细移液管中。然后小心地将玻璃毛细移液管的尖端插入背根神经节（DRG）。使用细胞内显微注射分配系统，缓慢注入1 µL的DNA质粒或RNA寡核苷酸溶液。

进行电穿孔时，用电极轻轻夹住目标背根神经节（DRG），并使用电穿孔系统施加5个方波电脉冲。随后，用尼龙缝线逐层缝合肌肉和皮肤。背根神经节电穿孔后两到三天，对小鼠进行腹腔麻醉，将其四肢固定在软木板上，沿中线左侧0.5厘米处做一长约1厘米的切口。

接着，纵向切开肌肉，例如臀大肌和梨状肌。然后暴露坐骨神经在坐骨大孔与坐骨切迹之间的节段。用显微外科镊子夹压该神经12秒，并用尼龙束膜缝线标记夹压部位。随后，用尼龙缝线缝合肌肉层和皮肤层。