电穿孔介导的小鼠背根神经节转染促进感觉轴突再生

取一只麻醉的小鼠，其暴露的L4和L5背根神经节含有感觉神经元细胞体。

显微注射移液器中加载调节轴突再生的荧光团标记的 RNA 构建体和示踪染料。

混合物注入 DRG。

使用电穿孔电极，向 DRG 施加电脉冲。

这会破坏感觉神经元细胞体的膜，产生孔隙，使构建体能够进入细胞质，从而促进转染。

缝合切口并让小鼠恢复。

几天后，重新麻醉并固定小鼠。

左侧中线的外侧做一个切口。解剖肌肉以暴露坐骨神经。

碎神经以损伤感觉神经元轴突。用缝合结标记该部位。

缝合切口并让小鼠恢复。

转染的构建体在DRG感觉神经元细胞体中靶向mRNA，瞬时调节蛋白质产生，以增强损伤后的感觉轴突再生。

对于DRG注射，将DNA质粒或RNA寡核苷酸加载到玻璃毛细管移液器中。然后小心地将毛细管玻璃移液器的尖端插入 DRG。并使用细胞内显微注射分配系统逐渐注射 1 微升 DNA 质粒或 RNA 寡核苷酸溶液。

对于电穿孔，用电极轻轻捏住目标DRG，并用电穿孔系统施加5平方电脉冲。随后，闭合肌肉，然后用尼龙缝合线缝合皮肤层。DRG电穿孔后两三天，腹膜内麻醉小鼠，将其四肢粘在软木板上，沿中线向左侧0.5厘米处做一个1厘米的切口。

接下来，纵向切割肌肉，例如臀大肌和梨状肌。然后暴露坐骨大孔和坐骨切迹之间的坐骨神经段。用显微外科镊子压碎神经12秒，用尼龙神经外缝线标记压碎部位。然后，用尼龙缝合线闭合肌肉和皮肤层。